去卵巢大鼠对睑板腺的组织结构及腺上皮细胞凋亡的影响

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目的:为探讨雌激素水平对睑板腺组织的影响,为临床上绝经后妇女干眼症的发病机制及睑板腺组织病理学变化提供实验依据。   方法:选择64只雌性青春期(6周龄)SD大鼠,随机分为去势组(去卵巢组,32只)、对照组(假手术组,32只);再将去势组、对照组的各32只大鼠分别按手术后6、12、18、24周随机分为4组,每组8只。去势组切除双侧卵巢,大鼠术前禁水,取6%水合氯醛(0.5ml/100mg体质量)腹腔注射,麻醉后固定四肢,在脊柱两侧第12肋尾侧剪毛,用2%碘酊皮肤消毒,75%酒精脱碘。沿脊柱后正中线外侧1~1.5cm处,以纵形切口依次切开皮肤、分离肌肉、打开壁层腹膜,进入腹膜腔,找到卵巢并切除。对照组步骤同去势组,但不切除卵巢,只切除卵巢周围小部分脂肪组织。大鼠饲养6、12、18、24周后分别处死,取右侧新鲜上睑板组织,用双面剃须刀片将睑板腺分成三部分,中间部分做电镜标本,内、外两侧部分分别做HE染色标本和免疫组织化学染色标本。两组大鼠分别应用眼科裂隙灯显微镜下用钴蓝光扫描技术行泪膜破裂时间(break-up time,BUT)、角膜上皮荧光素染色进行了检测,并采用放射免疫方法检测了血清雌二醇水平,免疫组织化学方法检测了睑板腺腺泡上皮细胞相关凋亡基因蛋白Bcl-2和Bax的表达;应用光学显微镜和透射电镜技术对睑板腺组织形态和超微结构进行了观察。所有数据采用SPSS11.5统计软件进行统计学处理。   结果:   (1)去势组于术后12~24周血清雌二醇的浓度显著低于对照组(P<0.05)。   (2)去势组于术后12~24周泪膜破裂时间、角膜上皮荧光素染色与对照组之间比较差异有显著性(P<0.05)。   (3)去势组于术后12~24周睑板腺导管管壁变薄,管腔扩大,管壁各层细胞萎缩,导管周围结缔纤维增多呈纤维化,部分腺泡失去正常腺泡结构。表现为组织结构排列紊乱,细胞体积变小,细胞核大小变化不明显,但细胞质明显减少,细胞核密集拥挤在一起,腺泡呈萎缩状态。   (4)透射电镜下去势组于术后12~24周睑板腺腺泡上皮中基底细胞体积变小,细胞质减少,细胞核形态不规则,细胞核内的染色质凝集、边集于核膜下方,由于切面的不同凝集的染色质可以以不同的方式散在于核不同切面的位置,细胞核边界清晰,核膜间隙宽窄不一。过渡细胞主要超微病理学改变表现为线粒体肿胀,线粒体嵴结构破坏,呈现出空泡化或云雾状改变,在细胞质可见许多髓样结构。   (5)去势组12~24周相关凋亡基因Bcl.2阳性细胞表达率明显低于对照组(P<0.05),Bax阳性细胞表达率明显高于对照组(P<0.05)。   (6)血清雌二醇水平与BUT有显著性相关关系(r=0.9661,P=0.0075)。   (7)血清雌二醇水平与角膜上皮荧光素阳性染色有显著性相关关系(r=-0.9549,P=-0.0451)。   (8)血清雌二醇水平与Bcl-2阳性细胞有显著性相关关系(r=-0.9600,P=0.0400)。   (9)血清雌二醇水平与Bax阳性细胞有显著性相关关系(r=-0.9714,P=-0.0286)。   结论:   1.去势组大鼠12~24周血清雌二醇浓度明显降低。   2.去势组大鼠,随术后时间的延长出现泪膜破裂时间缩短的现象,表现为泪膜稳定性降低,同时角膜上皮损伤逐渐加重。   3.去卵巢大鼠12~24周部分睑板腺腺泡上皮细胞结构紊乱,呈萎缩状态,功能减退。   4.雌激素水平与泪膜破裂时间、角膜荧光素染色、Bcl-2和Bax阳性细胞率有相关性。   5.去势组大鼠12~24周相关凋亡基因Bcl-2和Bax表达比例失衡,细胞凋亡加速,部分腺上皮细胞萎缩以及线粒体破坏,是雌激素水平降低导致睑板腺功能障碍的发病机制。
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