我国梨树腐烂病病原菌的初步鉴定及两种培养表型菌株的致病性分析

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梨树腐烂病是梨树上最重要的枝干病害之一,它的发生和危害遍及全国各梨产区,其中以西北、东北和华北地区发生较重。该病主要危害梨树的主枝和侧枝,导致树皮腐烂和枝干枯死,严重时可造成死树甚至毁园。但长期以来我国对苹果树腐烂病的研究较多而对梨树腐烂病的研究甚少,其病原菌种类及致病性尚缺乏系统性研究。本研究对本实验室保存的从我国不同省份采集的梨树腐烂病菌进行种类鉴定,并选取不同培养表型及rDNA-ITS序列差异菌株进行致病性分析,为进一步研究梨树腐烂病发生规律及有效防治措施提供参考依据。取得的研究结果如下:1.从本实验室保存的我国梨树腐烂病菌分离株中选取不同省份的部分菌株进行单孢纯化获得79份纯化菌株;观察其在PDA平板、25℃、黑暗条件下的菌落及分生孢子器形态,用菌丝块通过伤口接种测定其对‘翠冠’梨离体枝条的致病性,克隆部分菌株的rDNA-ITS序列并进行分析。结果表明:梨树腐烂病菌菌株有Ⅰ型和Ⅱ型两种菌落类型,在PDA平板上可产生多种类型的分生孢子器,对离体梨树枝条的致病性存在差异,rDNA-ITS的核苷酸序列相似率为99.98%~100%。所以我国梨树腐烂病病原菌虽然存在不同的菌落类型,但其rDNA-ITS的核苷酸序列分析显示均为V. mali var. pyri,与苹果树腐烂病菌分别聚在同一亚组的两个分支。2.选取菌落和rDNA-ITS序列差异明显的3个梨树腐烂病菌菌株(F-SD-8. F-BJ-2c-2和F-HN-2a-1)和1个苹果树腐烂病菌菌株(F-SX-A6),对其生物学特性进行比较,用菌丝块通过伤口接种对其在梨树、苹果树等木本植物离体枝条和梨树活体枝条上的致病性进行测定。结果表明,4个菌株的培养温度无明显差异,10~35℃均可生长,35℃及以上和4℃及以下生长较差;在Czapek培养基及脲素除外的碳、氮源上均可生长,其中甘露醇、麦芽糖、淀粉和酵母膏较佳;光照对4个菌株的影响有异,光照促进F-SD-8和F-BJ-2c-2生长,而对F-HN-2a-1和F-SX-A6无影响;F-SD-8、F-BJ-2c-2和F-HN-2a-1菌株生长的最适pH值为4-6,而F-SX-A6为4。致病性测定结果显示,F-SD-8和F-BJ-2c-2菌株虽然培养表型不同,但是它们在梨树枝条上的致病力均较强,而苹果树腐烂病菌菌株F-SX-A6则对苹果树枝条的致病力较强,F-HN-2a-1菌株虽然培养表型与F-SD-8相似,但它在10个不同梨品种以及7种不同木本植物枝条上的致病力均很弱且症状有异。田间接种后的症状观察,F-SD-8和F-BJ-2c-2均可以观察到分生孢子器和分生孢子,而F-HN-2a-1和F-SX-A6则没有。所以梨树腐烂病菌存在致病性分化,且V. mali的两个变种侵染时具有寄主偏爱性,此外它们除可侵染梨和苹果外,还可侵染桃、杏和海棠树枝条。3.以供试菌株在梨离体枝条上接种4d时产生的病斑以及在梨树皮液体培养基中培养10d时的培养液为材料,对产生的酶及其活性和pH值的变化进行分析。结果表明,梨和苹果树腐烂病菌在梨枝条寄主体内外均可分泌PG、PMG、Cx和xylanase。梨树腐烂病菌菌株F-SD-8和F-BJ-2c-2无论在寄主体内还是体外均以xylanase的活性最高,而苹果树腐烂病菌菌株F-SX-A6则以PG活性最高;检测接种F-SD-8、F-BJ-2c-2和F-SX-A6产生的病斑和培养液中的pH值均降低。梨树腐烂病菌弱致病力菌株F-HN-2a-1与其它3个菌株不同,其pH值以及酶活性在寄主体内外存在差异。
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