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鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种鸡的急性、高度接触性传染的病毒性疾病。该病自从1931年被报道以来,已由最初的呼吸型逐渐演变为肾型、腺胃型等各种类型。IBV至少包括29种血清型,并且新的血清型和变异株仍在不断出现。不同血清型之间的交叉保护差异较大。病毒中和多肽的鉴定能为防制病毒感染及研究病毒与宿主相互作用提供理论指导。 噬菌体展示(phage display)是一种将基因表达产物和亲和选择相结合的技术。它将目的基因与噬菌体外壳蛋白基因融合表达并展示在噬菌体表面,由于所展示多肽或蛋白质可保持相对独立的空间结构和生物活性,因而被广泛用于鉴定抗原或抗体表位、受体或配体功能区等。 本研究使用纯化的鸡传染性支气管炎病毒(IBV),从12肽噬菌体展示随机肽库中筛选特异性结合多肽。经过四轮淘筛,得到10个阳性噬菌体,通过测序与同源性分析,发现所有阳性噬菌体均包括一个含有组氨酸和丝氨酸的结构域“HHXHXS”,其中X可为多种氨基酸,在H与S之间间隔的氨基酸数目不等。 进一步对阳性噬菌体的血凝抑制活性及病毒中和特性进行鉴定,发现所有阳性噬菌体均能特异性抑制IBV对鸡红细胞的血凝活性,并能特异性中和IBV对HeLa细胞的感染。人工合成其中一条中和效价最高的线性多肽“N-GSH HRH VHS PFVC”,细胞中和试验证实该多肽同样具有病毒中和特性,其中和滴度为0.025μM。尽管该多肽在本动物组织与细胞的病毒中和作用有待进一步鉴定,但以上结果为鉴定病毒中和表位、探讨抗病毒药物、研究病毒与受体的相互作用及开发病毒诊断新方法等奠定了重要基础。 IBV的纤突蛋白(Spike,S)蛋白与病毒入侵细胞、病毒细胞嗜性、病毒中和反应等直接相关。本研究通过RT-PCR从IBV感染鸡胚尿囊液中扩增到全长S基因,通过测序及序列比较分析证明,该基因与呼吸型IBV代表毒株IBV M41株(GenBank accession:M21883.1)和Beaudette CK株(GenBank accession:AJ311317)相似程度分别为99%和97%,证明所扩增基因为IBV的S基因。S基因的克隆鉴定为后续研究奠定了基础。