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猪流行腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）,属于冠状病毒科冠状病毒属。是一种常见的猪的接触性肠道传染病,具有初生仔猪腹泻、呕吐、脱水等特征。PEDV的实验室检测主要包括免疫电镜技术、免疫荧光技术、微量血清中和试验、酶联免疫吸附试验、常规RT-PCR技术,但是这些方法灵敏度低且操作费时,尤其是不能对疾病做出早期诊断进而对疫情进行预警。荧光定量PCR（fluorescent quantitative realtime PCR,qPCR）具有特异性强、灵敏度高、重复性好、操作方便等优点。PEDV基因组的N基因具有高度保守性,本试验选取N基因作为检测方法的靶基因。参照GenBank中PEDV CV777株的基因全序列,设计出扩增N基因全长的特异性引物,另外设计一对特异性引物用于荧光定量PCR,扩增长度为190 bp的片段。利用常规RT-PCR技术从阳性病料中扩增出750 bp的N基因,序列比对结果为N基因序列与CV777株相对应的同源性为100%。然后将N基因克隆至pEASY-T1 Simple载体中,经测序鉴定后,选取正确的重组质粒进行10倍梯度稀释作为阳性标准品并以此制作荧光定量PCR标准曲线,从而建立一种快速检测PEDV含量的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。结果显示反应模板的浓度和Cq值呈良好的线性关系,建立的方程为Y=-3.287X+40.100,相关系数为0.999,扩增效率为101.5%,特异性试验中的TGRV、PRRSV、CSFV、PRV均为阴性。敏感性试验显示可检测的最低浓度为101拷贝数/μL,比常规的RT-PCR方法灵密度高100倍,重复性试验显示其变异系数为0.86～1.,68%。说明本试验建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的特异性、灵敏度和重复性都较好。应用建立的检测方法分别对福建省福州、莆田、泉州、三明等地的多个猪场的426份肛门拭子样品进行检测,结果显示PEDV的阳性率为51.41%（219/426）,说明PEDV在福建地区猪场内普遍存在。比较不同猪场的PEDV 阳性率,其中YS猪场阳性率最高为100%（104/104）,QF猪场阳性率最低为17.78%（8/45）;比较不同猪群的PEDV 阳性率,其中哺乳母猪群阳性率最高为68.00%（17/25）,保育猪群阳性率最低为46.03%（29/63）;说明不同猪场及不同猪群间PEDV阳性率差异较大。本试验对YLK、WY、YS三个规模化猪场进行分猪群PEDV检测,对病毒载量数据分析,结果显示记录腹泻的样本其病毒载量均超过1.26×104拷贝数/μL,采样时YS猪场哺乳仔猪腹泻情况严重,腹泻率为40～50%,该场哺乳仔猪群病毒载量超过1.26×104拷贝数/μL的为42.3%（11/26）,两者相近因此本文设立警戒线为1.26×103拷贝数/μL;YLK猪场哺乳母猪群病毒载量最高,超过1.26×103拷贝数/μL的占63.63%,说明本场虽未出现腹泻疫情,但存在很大的风险。同时本研究将腹泻仔猪进行剖检,对腹泻仔猪体内不同脏器进行PEDV定量检测,结果显示肠道部位的PEDV拷贝数明显高于其他脏器。最后为了研究母猪在PED免疫后的排毒情况,跟踪检测10头妊娠母猪和10头哺乳母猪在免疫后不同时间点肛门拭子样品中的PEDV,结果显示妊娠母猪在第10d有3头病毒载量超过1.26×102拷贝数/μL,说明已经开始排毒;第15d病毒载量全部超过1.26×102拷贝数/μL,其中3头超过1.26×103拷贝数/μL,说明已达排毒高峰期,30d的情况与15d相同,说明仍在排毒高峰期;哺乳母猪在第5d有2头病毒载量超过1.26× 102拷贝数/μL,说明已经开始排毒;第15d病毒载量全部超过1.26×102拷贝数/μL,其中1头超过1.26×103拷贝数/μL,说明已达排毒高峰期,第30d只有1头病毒载量超过1.26×102拷贝数/μL,说明排毒高峰期已过。对比发现妊娠母猪在免疫后排毒时间长,部分妊娠母猪在免疫30天后会转到分娩舍,此时处于排毒高峰期会通过接触传播使哺乳仔猪染毒,这对猪场制定合理的PED疫苗免疫计划提供理论依据。本研究利用荧光定量PCR对采集样本中的PEDV进行定量检测,通过数据比对结合临床情况初步确立了哺乳仔猪PED出现临床症状的警戒线为PEDV达到1.26×103拷贝数/μL以上,这对PEDV疫情预警有着重要意义。另外分析PEDV在各猪群的分布特点以及母猪免疫PED后体内PEDV的动态趋势,了解PEDV的传播方向和增殖规律。将其应用于养殖场,进行PEDV疫情监控,并为下一步更深入的探究PEDV预警体系和应用提供了理论依据。