颗石类微藻Pleurochrysis carterae培养条件的优化及室外培养研究

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颗石类微藻(颗石藻)因具有在细胞表面积累碳酸钙从而实现二氧化碳的长期封存的特性,使其在大气二氧化碳循环和海洋生态系统中扮演着重要角色。此外,颗石藻细胞还能够大量合成油脂用于生产生物燃料,因此具有潜在的经济价值。目前,有关颗石藻的研究大多集中在海洋生态、地质勘测和生理生化等方面,而颗石藻人工培养方面的研究工作尚不够完善。为了填补颗石藻培养方面研究上的不足,并为大规模开发利用颗石藻提供理论基础和技术支持,本研究以颗石藻Pleurochrysis carterae为实验材料,对其培养过程中所涉及到的主要营养物质(氮源和磷源)和培养条件(光照强度和培养温度)进行了优化,并探讨了硒(Se)元素对颗石藻P. carterae生长的影响,以获取颗石藻P. carterae的最佳培养条件,为后续研究奠定基础。在此基础上,本文还开展了颗石藻P. carterae在室内和室外条件下的扩大培养工作,研究结果将为颗石藻P. carterae的规模化培养提供理论依据。通过对培养基中氮浓度和磷浓度的优化,确定了P. carterae生长所需的最佳NaNO3浓度为225mg L-1,此时细胞最大比生长速率(μmax)(0.57day-1)和生物量产率(134.13mg L-1day-1)均达到最大值。磷浓度优化实验结果显示,颗石藻P.carterae生长对磷的需求量较低,5.65mg L-1的NaH2PO4·2H2O就足够满足细胞生长的需要。在研究光照强度对颗石藻P. carterae生长的影响时发现,低光照强度(≤50μmol·m-2·s-1)会限制颗石藻P. carterae细胞的生长。但在测试光照强度范围内,高光强(400μmol·m-2·s-1)并没有对颗石藻P. carterae的生长表现出明显的光抑制。培养温度实验结果表明,颗石藻P. carterae具有较广泛的温度适应性。但当培养温度高于30℃时,颗石藻P. carterae的生长就会受到抑制,甚至会引起细胞的解体死亡。在实验温度范围内,低温(15℃)会延长细胞的延滞期,但对细胞最大比生长速率和细胞产率的影响不大。培养基中低浓度硒(Se)的添加对颗石藻P. carterae的生长并没有明显的促进作用,但高浓度的硒(Se)(≥1μM)则会明显抑制颗石藻P. carterae细胞的生长。室内和室外条件下的扩大培养实验结果显示,颗石藻P. carterae具备大规模培养的潜力。其中,室外条件下,以颗石藻P. carterae在尺寸为(长×高×厚)500cm×60cm×10cm平板式光生物反应器中的生长情况最好,最大细胞密度可达1×106cells·mL-1,最大细胞干重可达0.35g L-1,其最大比生长速率和细胞产率分别可达0.32day-1和28.30mg L-1day-1。在大规模培养过程中,平板式光生物反应器的光程和通气搅拌效果会对颗石藻P. carterae的生长造成如下影响:①平板式光生物反应器的光程会影响反应器内部的光照强度,反应器光程越大,内部光照强度越弱,进而影响颗石藻P. carterae细胞的生长速率;②平板式光生物反应器的光程会影响反应器内部培养液的温度,反应器光程越小,内部培养液易达到较高的温度,这会对细胞状态和生长速率产生影响;③过高的通气搅拌速率会产生较大的剪切力,引起颗石藻P. carterae细胞的聚团;而过低的通气搅拌速率会影响细胞受光的均匀度,造成细胞整体生长速率的降低。
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