蛋鸡离体小肠对二肽吸收转运的研究

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小肽(Small Peptide)因其独特的吸收转运优势和特殊的生理药理学意义,已成为当今营养学和生物学研究的热点。本试验采用蛋鸡离体肠管培养法研究3种二肽的吸收转运特点。本研究主要内容如下:蛋鸡离体小肠对Gly-Gly、Gly-L-Leu和Met-Gly吸收转运的研究 采用蛋鸡离体外翻肠囊培养法,将小肠分为十二指肠、空肠前、中、后段和回肠5个部位肠段,制成肠囊分别置入5种培养液(空白PBS溶液,Gly+LeuPBS溶液,Gly-Gly肽PBS溶液、Gly-L-Leu肽PBS溶液和Met-Gly肽PBS溶液)39.5℃培养30 min,测定肠囊黏膜液、浆膜液和组织匀浆液中相应二肽和氨基酸含量。结果表明,含肽培养液中肠囊浆膜液和组织匀浆液Gly含量显著高于Gly+Leu培养液(P<0.05),其Gly含量依次是Gly-Gly>Gly-L-Leu>Met-Gly。Gly-L-Leu肽培养液中肠囊浆膜液和组织匀浆液Leu含量比Gly+Leu培养液高60.43%,差异显著(P<0.05)。回肠肠囊的Gly和Leu含量最高。各段肠囊中均未检出完整二肽。由此可见,蛋鸡离体小肠对二肽形式Gly和Leu的吸收较氨基酸形式更具优势;Gly和Leu的吸收主要发生在回肠;二肽在培养过程发生了水解。2.肠肽酶对Gly-Gly和Gly-L-Leu水解的研究采用蛋鸡离体外翻肠段培养法,将小肠分为5个部位肠段,每个肠段分别在2种二肽培养液(Gly-Gly或Gly-L-Leu对照培养液,Gly-Gly或Gly-L-Leu培养液 + 肽酶抑制剂Bestatin和Amastatin 的抑制培养液)中39.5℃培养25 min,每5 min取样一次,测定培养液中的二肽含量。结果表明,培养5 min后2种培养液中均未能检测到完整Gly-Gly,对照培养液Gly-L-Leu含量降低83.25%,抑制培养液则下降56.6%,而抑制培养液10min后无显著降低(P>0.10)。各培养时段抑制培养液中Gly-L-Leu含量均显著高于对照培养液(P<0.05)。由此认为,离体肠囊在培养过程中能够迅速释放肠肽酶,快速水解2种二肽。肽酶抑制剂Bestatin和Amastatin能抑制Gly-L-Leu的水解,但不能抑制Gly-Gly的水解。3.添加酶抑制剂对Gly-L-Leu吸收转运的研究采用蛋鸡离体外翻肠囊培养法,将小肠分5个部位肠段制备外翻肠囊。试验设2个试验组。试验1组为培养液(黏膜液)添加酶抑制剂(Bestatin和Amastatin),浆膜液不加;试验2组为浆膜液添加酶抑制剂,培养液(黏膜液)不添加。肠囊置于培养液39.5℃培养15 min,测定各肠囊黏膜液、浆膜液和组织匀浆液中Gly-L-Leu、Gly和Leu含量。结果表明,试验1组Gly-L-Leu含量显著高于试验2组(P<0.05),两组黏膜液的Gly-L-Leu含量都显著高于浆膜液和组织匀浆液(P<0.05)。试验1组各肠囊黏膜液的Gly-L-Leu含量差异不显著(P>0.05);试验2组除回肠外的其它肠囊黏膜液均未测到<WP=8>Gly-L-Leu。两试验组中回肠浆膜液和组织匀浆液的Gly-L-Leu含量最高。据此认为,仅有少量完整Gly-L-Leu能够被小肠完整吸收,其中回肠对Gly-L-Leu吸收最多。试验主要结论如下:1.二肽形式的氨基酸(Gly,Leu)比游离氨基酸形式的吸收转运率高;3种二肽形式Gly吸收转运量依次是:Gly-Gly>Gly-L-Leu>Met-Gly。2.蛋鸡离体肠囊在培养过程中能够迅速释放肠肽酶,快速水解Gly-Gly肽和Gly-L-Leu肽。3.肽酶抑制剂(Bestatin和Amastatin)可以抑制肠肽酶对Gly-L-Leu肽的水解,但是不能抑制肠肽酶对Gly-Gly肽的水解。4.添加肽酶抑制剂,39℃培养15 min,在浆膜液和组织匀浆液中可以检测到少量完整Gly-L-Leu,证实少量Gly-L-Leu可被蛋鸡小肠快速吸收转运。5.试验分肠段培养的结果表明,Gly,Leu和Gly-L-Leu在蛋鸡回肠比其它肠段部位的吸收转运量高。
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