PGE2受体EP2、EP4在体外培养SD大鼠软骨细胞中诱导Cx43表达变化中的作用研究

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目的:本实验通过对体外培养SD大鼠软骨细胞中PGE2特异性受体EP2、EP4阻断后诱导Cx43表达变化的研究,探讨PGE2是否通过特异性受体EP2或EP4调控Cx43的表达变化,进一步完善软骨细胞的新陈代谢调控机制。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法获得体外培养SD大鼠原代软骨细胞,细胞经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定。待细胞生长到适宜浓度时依照实验方案分组要求A组(EP2干扰组)、B组(EP4干扰组)、C组(EP2+EP4干扰组)、D组(空白对照组)加入相应的浓度的PGE2及EP2阻断剂AH6809和EP4阻断剂ONO-AE3-208作用8h后收集样本分别做实时定量PCR(RT-PCR)以及Western blot等实验检测。结果:1.与对照组相比,EP2干扰组大鼠软骨细胞Cx43mRNA表达量明显升高,差异显著(P<0.05);EP2干扰组、EP2+EP4干扰组大鼠软骨细胞Cx43 mRNA表达量无统计学意义P≥0.05)。2.对照组平均OD值为:1.0213±0.1711;实验组平均OD值为:EP2干扰组2.3126±0.3001;EP4 干扰组:1.145±0.0768;EP2+EP4 干扰组:0.9094±0.0045。与对照组相比,EP2干扰组大鼠软骨细胞中Cx43表达量明显升高,差异具有显著的统计学意义(P<0.05)。结论:此次实验结果显示PGE2不是通过PGE2-EP2途径上调Cx43 mRNA及蛋白的表达量,而是通过PGE2-EP4途径上调Cx43 mRNA及蛋白的表达量。进一步说明了 PGE2与Cx43的密切关系,Cx43可以将PGE2释放到细胞外,反过来PGE2也可以上调Cx43的表达。这也有助于我们进一步解释OA发展的机制。并为OA的治疗提供潜在的目标位点。
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