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目的:去乙酰氧母菊素(leucodin)是一种倍半萜内酯,分离于茵陈蒿的地上部分。研究发现茵陈蒿具有一定的抗炎和保肝活性,但仍未确定来自茵陈蒿的生物活性成分leucodin是否能改善乙醇诱导的肝细胞损伤并伴有炎症。本研究采用了脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)联合刺激几种类型的巨噬细胞,以及肝细胞暴露于乙醇的模型,以研究leucodin如何通过嘌呤受体P2X配体门控性离子通道7(purinergic receptor P2Xligand-gated ion channel 7,P2X7R)途径抑制巨噬细胞中的炎症反应,并减轻乙醇诱导的肝细胞中的脂质蓄积。方法:采用小鼠腹腔巨噬细胞,小鼠骨髓来源的巨噬细胞和人巨噬细胞THP-1细胞等若干种类巨噬细胞,用不同浓度leucodin(1μM和5μM)预处理1小时,然后用LPS和ATP刺激。通过蛋白印迹分析IL-1β、P2x7R和NLRP3的蛋白表达水平。将对数生长期的HepG2细胞暴露于乙醇以诱导脂质沉积。在此之前用不同浓度的leucodin(1μM和5μM)预处理对数生长期HepG2细胞。油红O染色实验分析HepG2细胞形态学变化,并观察脂质合成相关的重要因子胆固醇调节元件结合蛋白-l(Sterol Regulatory Element-binding Protein-1,SREBP1)免疫荧光染色的荧光强度变化;通过蛋白印迹检测AMP依赖的蛋白激酶α(AMP-activated Kinaseα,AMPKα)、P-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACC)、P-ACC的蛋白表达用于确定leucodin是否抑制HepG2细胞中的脂质沉积。并进行leucodin的毒性检验,利用体外MTT分析检测小鼠腹膜巨噬细胞的生存率。基于Griess反应测量培养基中积累的亚硝酸盐作为NO产生的指标。结果:LPS加ATP在小鼠腹膜巨噬细胞中启动IL-1β裂解和释放,并在4小时达到峰值。Leucodin在200μM内没有显示出显著的毒性,并且有效抑制了巨噬细胞中pro-IL-1β的裂解和成熟IL-1β的释放。此外,P2x7R拮抗剂和胱天蛋白酶-1抑制剂也降低了 IL-1β的释放和切割。另外,leucodin抑制LPS/ATP刺激的巨噬细胞中的 P2x7R,Toll 样受体-4(Toll Like Receptor-4,TLR4)和 Nod 样受体蛋白 3(NOD-like Receptor Pyrin Domain Containing 3,NLRP3)表达。用不同浓度的leucodin预处理HepG2细胞1小时,然后暴露于乙醇中24小时。Leucodin抑制脂质蓄积并增强暴露于乙醇的HepG2细胞中AMPK和ACC的磷酸化。此外,leucodin抑制乙醇处理的HepG2细胞中甾醇调节元件结合蛋白-1(Sterol Regulatory Element-binding Protein-1,SREBP1)和 ACC 的表达。结论:Leucodin具有抑制巨噬细胞炎症反应和抑制肝细胞脂质蓄积的能力,这表明有针对性的治疗潜力,针对酒精性肝病的炎症和脂质代谢。