天力克和莪术油对肝癌细胞株HepG-2抗肿瘤机制的比较研究

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目的研究比较中药复方制剂天力克、单药莪术挥发油及5-Fu体外对人肝癌细胞株HepG-2抗肿瘤作用及其机制的异同。方法采用体外细胞培养技术,光镜、荧光显微镜及透射电镜观察细胞结构变化、MTT法观察细胞生长抑制作用、流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,Hoechst 33258染色试剂染色观察药物处理肝癌HepG-2细胞后的形态变化,凯基TRAP-银染法研究药物处理肝癌HepG-2细胞后,端粒酶活性的表达及免疫细胞化学技术研究药物处理肝癌HepG-2细胞后,survivin、NF-κB蛋白的表达情况。结果MTT法证实莪术挥发油对肝癌HepG-2细胞有明显的抑制作用,且有明显的浓度—时间依赖性;天力克对肝癌HepG-2细胞未显示出抑制作用。镜下观察天力克对人肝癌细胞的作用主要是导致细胞浆空泡变性,莪术挥发油作用后可见细胞出现典型凋亡细胞形态改变:细胞染色质浓缩,聚集于核边缘形成块状或新月状;细胞体积缩小,核固缩浓染,细胞膜出泡、凋亡小体形成。流式细胞仪检测结果显示天力克、莪术油和5-Fu作用后,S期细胞比例增高,以天力克作用为最强(P<0.01)。莪术油组与5-Fu组作用相近,且可诱导细胞凋亡与天力克组、阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05);AV/PI染色后流式细胞仪检测显示天力克作用细胞后出现磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl—serine,PS)的膜外翻,未出现晚期凋亡;莪术油、5-Fu作用细胞后出现细胞凋亡,并且莪术油可直接导致细胞坏死,与阴性对照组、天力克组、5-Fu组比较差异有显著性(P<0.05)。免疫组化示天力克组、莪术油组和5-Fu组Survivin蛋白及NF-κBp65的表达均下调(P<0.05)。天力克组下调Survivin蛋白最为明显(P<0.01);凯基TRAP-银染法研究莪术油作用细胞24h后,莪术油组、天力克组及5-Fu组端粒酶活性均降低,天力克组作用最明显与莪术油组、5-Fu组比较有显著性差别(p<0.05)。结论天力克主要抑制细胞增殖、分裂,莪术油、5-Fu则主要诱导细胞凋亡。天力克可显著改变细胞周期,几乎阻滞所有细胞于S期,对细胞周期的改变作用最强。天力克只诱导细胞发生早期凋亡;而Survivin蛋白及NF-κB的表达下调,端粒酶活性明显降低可能为其抗肿瘤作用的主要机制。
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