论文部分内容阅读
目的:本研究旨在探讨新兴污染物TBBPA及其衍生物TBBPA-BHEE、TBBPABGE、TBBPA-BAE和TBBPA-BDBPE对人胎盘BeWo细胞增殖活性的影响,并检测TBBPA和TBBPA-BHEE对BeWo细胞ATP含量和线粒体膜电位的影响,以探索TBBPA和TBBPA-BHEE线粒体相关胎盘毒性机制;本研究重点关注TBBPA和TBBPA-BHEE对BeWo细胞孕烯醇酮和孕激素分泌水平的影响,并探讨TBBPA和TBBPA-BHEE对BeWo细胞类固醇激素生成关键酶基因和蛋白表达的影响,以探索TBBPA和TBBPA-BHEE对人胎盘细胞类固醇激素分泌的影响机制。方法:1.采用MTS法检测0-100μM的TBBPA、TBBPA-BHEE、TBBPA-BGE和TBBPA-BDBPE及0-50μM TBBPA-BAE染毒处理24 h和48 h对BeWo细胞增殖活性的影响。2.检测0、0.05、1、10和100μM的TBBPA和0、0.05、1、10和25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理48 h对BeWo细胞线粒体膜电位的影响。3.检测0、0.05、1、10和100μM的TBBPA和0、0.05、1、10和25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理48 h对BeWo细胞内ATP含量的影响。4.采用ELISA技术检测0、0.05、1、10和100μM的TBBPA和0、0.05、1、10和25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理BeWo细胞48 h后,含毒培养基中孕烯醇酮和孕激素的水平。5.采用qPCR方法检测0、0.05、1、10和100μM的TBBPA和0、0.05、1、10和25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理BeWo细胞48 h后,BeWo细胞内cyp11a1和3β-hsd基因mRNA的表达水平。6.采用Western Blot实验检测0、0.05、1、10和100μM的TBBPA和0、0.05、1、10和25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理BeWo细胞48 h后,BeWo细胞内CYP11A1和3β-HSD的蛋白表达水平。结果:1.MTS检测结果发现,与对照组相比,TBBPA、TBBPA-BHEE、TBBPA-BGE和TBBPA-BAE分别染毒处理24 h和48 h对BeWo细胞增殖活性具有明显的抑制作用;0-100μM TBBPA-BDBPE染毒处理24 h对BeWo细胞增殖活性无明显影响,0.1-100μM TBBPA-BDBPE染毒处理48 h可轻度抑制BeWo细胞的增殖活性。2.与对照组相比,100μM的TBBPA和10、25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理48 h均能诱导BeWo细胞线粒体膜电位去极化。3.与对照组相比,100μM的TBBPA和10、25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理48 h均显著降低BeWo细胞内ATP的含量。4.与对照组相比,100μM的TBBPA染毒处理48 h可显著增加BeWo细胞分泌的孕烯醇酮和孕激素水平,分别增加2.54和2.07倍;0-25μM的TBBPABHEE染毒处理BeWo细胞48 h可剂量-依赖性的促进孕烯醇酮和孕激素的分泌,0.05、1、10和25μM TBBPA-BHEE可使孕烯醇酮水平分别增加1.10、1.22、1.54和3.04倍,使孕激素水平分别增加1.06、1.22、1.58和1.61倍。5.qPCR检测cyp11a1和3β-hsd基因mRNA的表达水平发现,与对照组相比,100μM的TBBPA和10、25μM的TBBPA-BHEE可轻度上调cyp11a1基因mRNA的表达水平,0-100μM的TBBPA对3β-hsd基因mRNA的表达水平无明显影响,10和25μM的TBBPA-BHEE显著下调3β-hsd基因mRNA的表达水平。6.Western Blot检测CYP11A1和3β-HSD的蛋白表达水平的研究结果发现,与对照组相比,0-100μM的TBBPA和0-25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理48 h对BeWo细胞CYP11A1和3β-HSD的蛋白表达均无明显影响。结论:1.0-100μM的TBBPA、TBBPA-BHEE及TBBPA-BGE和0-50μM的TBBPABAE可剂量-和时间-依赖性的抑制BeWo细胞的增殖活性,五种实验化合物对胎盘BeWo细胞的毒性大小顺序为:TBBPA-BHEE>TBBPA-BAE>TBBPA-BGE>TBBPA>TBBPA-BDBPE,毒性大小机制不完全依赖于化合物的疏水性大小。2.TBBPA和TBBPA-BHEE可通过诱导线粒体膜电位去极化和降低细胞内ATP含量介导BeWo细胞毒性,且TBBPA和TBBPA-BHEE可能是诱导BeWo细胞凋亡的激动剂。3.TBBPA和TBBPA-BHEE是潜在的内分泌干扰物,可刺激胎盘BeWo细胞分泌孕烯醇酮,并可通过提高孕烯醇酮的分泌水平刺激孕激素分泌增加。4.TBBPA和TBBPA-BHEE促进孕烯醇酮和孕激素分泌的机制与类固醇激素生成关键酶CYP11A1和3β-HSD表达无关。但TBBPA和TBBPA-BHEE促进孕激素分泌的机制在一定程度上与孕烯醇酮分泌增加有关。