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目的:观察酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitor,TKI)舒尼替尼、埃克替尼、厄洛替尼对人T淋巴细胞的影响。初步探讨酪氨酸激酶抑制剂与生物免疫治疗联合的可行性。方法:应用免疫磁珠分选的方法从外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中分选出T淋巴细胞,分别加入舒尼替尼、埃克替尼、厄洛替尼培养1小时后,加入PMA刺激T细胞增殖,培养48-72小时后分别收集细胞和细胞培养上清。采用四氮甲唑兰比色法(MTT法)检测各组细胞的增殖情况。流式细胞仪测定各组T细胞亚群分布的变化情况,并检测各组T细胞凋亡和细胞周期的变化。采用ELISA法检测各组细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β的分泌水平。应用LDH法检测酪氨酸激酶抑制剂对T细胞特异性杀瘤活性的影响。结果:1.对T细胞增殖的影响:本研究比较了培养72小时后各组细胞的增殖情况,发现舒尼替尼、埃克替尼、厄洛替尼均能够抑制T细胞的增殖,各组抑制率如下:舒尼替尼 50ng/ml 组为 25.6±5.4%(P=0.015),100ng/ml 组为 43.2±1.8%(P=0.001),200ng/ml 组为 66.0±4.4%(P=0.001);埃克替尼 1000ng/ml 组为12.0±5.0%(P=0.053),2500ng/ml 组为 20.0±3.6%(P=0.011),5000ng/ml组为 21.6±5.6%(P=0.022);厄洛替尼 500ng/ml 组为 27.6±2.7%(=0.003),1500ng/ml 组为 35.0±2.0%(P=0.001),3000ng/ml 组为 49.1±1.3%(P<0.001)。2.对T细胞凋亡的影响:采用Annexin-V-PI染色法测定各组细胞在培养48小时后的凋亡比例,各组凋亡比例如下:对照组25.2±2.7%,舒尼替尼50ng/ml组24.3±2.9%,100ng/ml 组 28.7±1.2%,200ng/ml 组 27.0±3.3%;埃克替尼 1000ng/ml组 28.4±2.3%,2500ng/ml 组 28.1±3.3%,5000ng/ml 组 29.7±2.8%;厄洛替尼500ng/ml 组 27.6±3.5%,1500ng/ml 组 25.5±2.3%,3000ng/ml 组 28.6±2.3%。各实验组细胞凋亡比例与对照组细胞凋亡比例均无统计学差异(P>0.05)。3.对T细胞周期分布的影响:各组细胞培养72小时后,测定各组细胞的细胞周期分布情况,舒尼替尼、埃克替尼、厄洛替尼能够将T细胞阻滞在G0/G1期,各组G0/G1期细胞比例如下:对照组:92.87±1.60%,舒尼替尼组:50ng/ml组92.61±1.22%(P=0.83),100ng/ml 组 95.43±0.61%(P=0.06),200ng/ml 组 96.82±1.09%(P=0.024);埃克替尼组:1000ng/ml 组 92.00±0.92%(P=0.46),2500ng/ml组 94.07±2.34%(P=0.50),5000ng/ml 组 94.75±2.24%(P=0.30);厄洛替尼组:500ng/ml 组 94.30±3.14%(P=0.52),1500ng/ml 组 94.72±1.65%(P=0.235),3000ng/ml组96.05±1.05%(P=0.045)。4.对T细胞亚群的影响:各组细胞培养72小时后测定各组细胞中CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例,结果发现三者对CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例无明显影响,与对照组比较无统计学差异(P>0.05),同时发现舒尼替尼各浓度组均能够下调CD4+CD25+CD127-Treg细胞的比例,与对照组比较具有统计学差异(P<0.05),而埃克替尼组和厄洛替尼分别在5000ng/ml、3000ng/ml时实验组Treg细胞百分比较对照组下降,具有统计学差异(P<0.05)。5.对细胞因子分泌的影响:培养72小时后,舒尼替尼能够抑制IFN-γ、IL-2、TGF-β的分泌,对IL-10抑制作用较弱,对IL-4的分泌未产生影响;埃克替尼使TGF-β分泌下降,而对IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10均未产生影响;厄洛替尼抑制了 IFN-γ、IL-2、TGF-β的分泌,而对IL-4、IL-10未产生影响。6.T细胞杀伤活性的变化:培养72小时后,舒尼替尼、埃克替尼、厄洛替尼均使T细胞的杀伤活性下降,效靶比40:1时对照组杀伤率为63.2±8.5%,实验组各组杀伤率为:舒尼替尼50ng/ml组为45.9±1.2%(P=0.026),100ng/ml组为18.3±1.4%(P=0.001),200ng/ml组为4.3±3.9%(P<0.001);埃克替尼1000ng/ml 组为 71.4±7.9%(p=0.289),2500ng/ml 组为 49.1±6.4%(P=0.084),5000ng/ml 组为 29.4±11.7%(P=0.016);厄洛替尼组 500ng/ml 组为 30.8±5.6%(P=0.005),1500ng/ml 组为 22.3±1.6%(P=0.001),3000ng/ml 组为 19.6±9.8%(P=0.004),效靶比20:1时对照组杀伤率为39.7±6.2%,实验组各组杀伤率如下:舒尼替尼 50ng/ml 组为 29.4±9.7%(P=0.195),100ng/ml 组为 12.1±6.4%(P=0.006),200ng/ml 组为 1.4±0.9%(P<0.001);埃克替尼 1000ng/ml 组为42.5±7.4%(P=0.646),2500ng/ml 组为 11.4±8.1%(P0.009),5000ng/ml 组为10.4±6.4%(P=0.005);厄洛替尼组 500ng/ml 组为 38.0±6.7%(P=0.755),1500ng/ml组为 17.5±9.4%(P=0.027),3000ng/ml 组为 17.5±6.5%(P=0.013)。结论:酪氨酸激酶抑制剂能够抑制T细胞的增殖及部分细胞因子的分泌,同时能够下调Treg细胞的比例,将细胞阻滞在G0/G1期可能是抑制T细胞增殖的机制之一,酪氨酸激酶抑制剂能够抑制T细胞的杀伤活性,埃克替尼对T细胞功能的影响要弱于厄洛替尼和舒尼替尼对T细胞功能的影响,埃克替尼可能更适合与生物免疫治疗联合。