【摘 要】
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目的:1.探究S-雌马酚体外对乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期、迁移、侵袭的影响及作用机制。2.探究S-雌马酚体内对乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长、转移的影响。方法:1.采用CCK-8实验评价S-雌马酚对乳腺癌细胞活力的影响;使用细胞克隆形成实验检测S-雌马酚对乳腺癌细胞克隆形成能力的影响;使用Hoechst 33342染色、Annexin V/PI双染及流式细胞仪测凋亡检测S-雌马酚对乳腺癌细胞凋亡的影响;通
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目的:1.探究S-雌马酚体外对乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期、迁移、侵袭的影响及作用机制。2.探究S-雌马酚体内对乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长、转移的影响。方法:1.采用CCK-8实验评价S-雌马酚对乳腺癌细胞活力的影响;使用细胞克隆形成实验检测S-雌马酚对乳腺癌细胞克隆形成能力的影响;使用Hoechst 33342染色、Annexin V/PI双染及流式细胞仪测凋亡检测S-雌马酚对乳腺癌细胞凋亡的影响;通过线粒体膜电位检测和蛋白质免疫印迹法检测S-雌马酚对乳腺癌细胞线粒体凋亡通路及相关蛋白的影响;通过PI单染及流式细胞仪测周期和蛋白质免疫印迹法检测S-雌马酚对乳腺癌细胞周期及相关蛋白的影响。2.采用q RT-PCR实验筛选差异表达的mi RNAs,并检测S-雌马酚对mi RNAs的影响;使用Star Base网站分析mi R-10a-5p在临床样本中的表达水平;使用Target Scan网站预测mi R-10a-5p的靶基因;通过细胞转染、CCK-8实验分析mi R-10a-5p对细胞活力的影响;通过蛋白质免疫印迹实验检测相关蛋白的表达。3.采用划痕实验、Transwell实验检测S-雌马酚对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响;通过蛋白质免疫印迹实验检测转移相关蛋白的表达。4.建立MCF-7和4T1乳腺癌细胞原位移植裸鼠模型,检测S-雌马酚对荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响;检测S-雌马酚对荷瘤裸鼠血清中肿瘤标志物CEA、CA125、CA153的影响;通过活体成像仪检测S-雌马酚对肿瘤转移的影响;通过免疫组织化学检测S-雌马酚对肿瘤组织中Ki 67、MMP-2、MMP-9蛋白的影响。结果:1.S-雌马酚对MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3、4T1乳腺癌细胞的增殖均具有抑制作用,且对MCF-7细胞的抑制效果最好。2.S-雌马酚抑制MCF-7细胞的克隆形成,促进其凋亡,诱导其线粒体膜电位降低,同时抑制MCF-7细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进促凋亡蛋白Bad、Cytochrome C、Apaf-1的表达,促进Cleaved caspase-9和Cleaved caspase-3蛋白的表达。3.S-雌马酚诱导MCF-7细胞发生G1期细胞周期阻滞,抑制细胞周期蛋白（Cyclin E1、Cyclin D3）和周期蛋白依赖性激酶（CDK2、CDK4、CDK6）的表达。4.MCF-7细胞中mi R-10a-5p的水平越高,其细胞的增殖能力越弱。S-雌马酚通过上调MCF-7细胞中mi R-10a-5p的水平,进而抑制PI3K p110α蛋白的表达和磷酸化Akt的水平。5.S-雌马酚能够显著抑制MCF-7和4T1细胞的迁移和侵袭能力,抑制MMP-2和MMP-9蛋白的表达。6.在乳腺癌原位异种移植模型中,S-雌马酚能够抑制MCF-7细胞荷瘤裸鼠肿瘤的生长,降低血清中肿瘤标志物CEA、CA125、CA153的水平和肿瘤组织中Ki 67的表达。同时,能够抑制4T1细胞荷瘤裸鼠肿瘤的转移,降低肿瘤组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论:1.S-雌马酚在体外能够有效抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进乳腺癌细胞凋亡,并且诱导乳腺癌细胞发生G1期细胞周期阻滞。其促进乳腺癌细胞凋亡的分子机制与调控mi R-10a-5p的水平有关,通过上调乳腺癌细胞中mi R-10a-5p的水平,从而抑制PI3K/AKT信号通路的激活,进而引发线粒体凋亡过程。2.S-雌马酚在体内抑制乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤的生长和转移,减缓乳腺癌的发展。
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