糖化酶作为水解淀粉的重要酶制剂,在众多行业中均有广泛应用。因此,选育高产糖化酶菌株对糖化酶工业化生产具有重要的意义。本文以糖化酶生产菌株黑曲霉为研究对象,对出发菌株的特性、原生质体制备的条件、诱变方法及条件以及诱变菌株的特性进行了研究。出发菌株在琼脂固体培养时菌落为白色、边缘整齐、无光泽、轮胎状。液态培养初期菌体快速生长,菌丝体成球数量逐渐增加,同时伴随微量乙醇的产生;糖化酶活力随菌丝球的破碎不断升高,当发酵液中多以游离断裂菌丝存在时糖化酶活力达到最高值8034.52 U/mL,发酵后期随菌丝断裂程度加剧,糖化酶活力逐渐降低。出发菌株可产胞外淀粉酶和蛋白酶,不产脂肪酶、纤维素酶、果胶酶。以原生质体制备量及再生率为依据,确定了出发菌株制备原生质体最适条件:用4 mL酶液(0.16%氯化钙,0.5%纤维素酶和0.5%蜗牛酶)处理一张长满菌丝体的玻璃纸(2 cm×2 cm)3 h,6层擦镜纸过滤酶解液后可获得105个/mL原生质体,原生质体再生率可达30%。采用紫外诱变、硫酸二乙酯诱变、氯化锂诱变、大气压冷等离子诱变以及复合诱变对出发菌株的原生质体进行诱变筛选。紫外诱变、氯化锂诱变、复合诱变并未获得高产糖化酶菌株,大气压冷等离子不适合出发菌株原生质体诱变,而硫酸二乙酯诱变效果最好,筛选出两株糖化酶高产菌株D1-02和D2-15。两株诱变菌株在琼脂固体培养时菌落为白色、边缘整齐、光滑有光泽、中间凸起。最大产糖化酶活力可达到9333.62 U/mL及9888.72 U/mL,较出发菌株产糖化酶活力分别提高了 16.67%和23.61%。传代11代,产糖化酶活力分别维持在9204.71 U/mL和9500.66 U/mL,具有良好的遗传稳定性。胞外酶系与出发菌株相同。