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人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus, HCMV)与单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus, HSV-1)都是属于疱疹病毒家族的DNA病毒,在人群中的感染率很高。HCMV是导致新生儿先天性畸形和智力障碍的最主要病毒因素,目前抗病毒药物主要针对的是DNA聚合酶UL54,容易产生抗药性。为了扩展新抗病毒药物的研究思路,本文从病毒颗粒组装和免疫逃逸这两个病毒增殖过程中不可或缺的环节研究了病毒-宿主之间的相互作用。HSV-1病毒可在体内引起长期潜伏感染,立即早期ICP4基因是调控其基因表达引发增殖性感染的关键激活因子。我们通过对靶向HSV-1病毒ICP4基因mRNA的EGSs研究探索了这种新型抗病毒技术抑制病毒基因表达及增殖的效果。人巨细胞病毒组装蛋白前体UL80.5在病毒颗粒组装中起着不可或缺的作用,与多种病毒衣壳蛋白相互作用,起始并调控整个组装过程。本研究通过酵母双杂筛选发现SUMO化(Small Ubiquitin-like Modify, SUMOylation,小泛素样修饰)E2蛋白连接酶UBC9可以与UL80.5蛋白相互作用；UL80.5蛋白之后被证明可以被SUMO化,SUMO化位点为K371赖氨酸位点；通过竞争性免疫共沉淀实验发现增强UL80.5蛋白的SUMO化修饰可以抑制其与衣壳蛋白UL86的结合；UL80.5蛋白的SUMO化修饰缺失对病毒增殖略有抑制,但并不是重要影响因素。这些结果暗示HCMV病毒可能通过利用宿主细胞SUMO化系统帮助自身进行衣壳组装,但这种需要并不是必不可少的。人巨细胞病毒UL84蛋白被认为是与裂解性复制的起始有关的重要蛋白,它通过靶向结合oriLyt RNA/DNA杂交区域的茎-环RNA序列发生作用。UL84蛋白除调控DNA复制外,根据其DExD/H-box家族同源的结构分析还被认为有转录调控、RNA转运等功能的可能性。本研究通过酵母双杂筛选发现转录辅助因子FHL2可以与UL84蛋白相互作用,且共定位于细胞核；UL84蛋白与FHL2蛋白的结合区域为400-586位氨基酸,该区域包含有DExD/H-box家族同源的walker B结构域；双荧光实验显示UL84蛋白对IFNP(干扰素β)的转录有抑制作用,而FHL2蛋白对IFNβ转录有增强作用,且这两种结果相互拮抗。我们构建了靶向HSV-1 (herpes simplex virus 1)主要转录调节子ICP4蛋白mRNA的EGS,ICP4蛋白对于病毒早期和晚期基因表达及病毒增殖是必不可少的。EGS(External guide sequence)是一类特异识别与目标mRNA形成与tRNA前体相似二级结构的RNA序列,从而诱导内源的核酶P切割靶向mRNA.本研究发现根据EGS筛选系统构建的C468-A诱导核酶P切割ICP4基因mRNA的效率比根据天然前体tRNA结构构建的SER-A高60倍。在表达C468-A和SER-A的HSV-1病毒感染细胞中,ICP4基因表达分别下降大约97%和75%,病毒增殖抑制分别约7000和500倍。