目的：2型糖尿病作为一种流行性疾病已经成为重大的公共健康问题，其慢性并发症可广泛累及肝、肾、心、肺、视网膜、血管、神经系统、骨骼肌及皮肤等组织器官，其中糖尿病性肝脏病变主要表现为非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholicfatty liver disease,NAFLD）。NAFLD与2型糖尿病（Type2diabetesmellitus，T2DM）拥有共同土壤即炎症与胰岛素抵抗（Insulin resistence，IR）^[1]。Toll样受体4（Tolllike receptor4，TLR4）是主要的模式识别受体，除外源性配体外，还可与炎症、组织损伤、应激等相关的内源性配体（danger-associated molecular patterns，DAMPS）结合[2]，参与机体免疫应答、炎症反应、氧化应激，在多种慢性炎症和自身免疫性疾病的发生、发展过程中起到重要作用[3]。另外，锌指蛋白A20是由炎症反应激活的重要调节蛋白，可抑制由TLR4介导的NF-κB的活化，是TLR4/NF-κB信号通路重要的负反馈调节因子[4]。辛伐他汀是羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂，可减少胆固醇及低密度脂蛋白形成[5]，近来研究证实辛伐他汀具有调脂作用之外的抗炎、抗氧化、免疫调节等作用，在多种慢性炎症疾病中具有广大应用前景。本实验应用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素（streptozocin, STZ）制备2型糖尿病大鼠模型，检测其肝脏中TLR4的表达及辛伐他汀干预后的变化，以阐明辛伐他汀对糖尿病性肝脏病变的保护作用及其机制，同时检测锌指蛋白A20在2型糖尿病大鼠肝脏组织中的表达并探讨其作用机制。方法：40只雄性清洁级Sprague-Dawle（ySD）大鼠，鼠龄6周，体重为180g±20g。清洁实验室环境下予普通饲料适应性喂养1周，后应用随机数字表法从40只SD大鼠中随机抽取10只作为正常对照组（A组），余为实验组。对照组以普通饲料喂养，实验组以高糖高脂饲料（普通饲料中加入20%白砂糖、2.5%胆固醇、15%熟猪油）[6]喂养。实验组在高糖高脂饲料喂养4周后，一次性腹腔注射STZ30mg/kg。实验第6周末选取空腹血糖大于正常大鼠空腹血糖3个标准差（即7.8mmol/L）且伴有胰岛素敏感指数（Insulin Sensitivity Index,ISI）下降者确定为2型糖尿病大鼠模型^[7]，共26只，将其随机分为两组，即单纯2型糖尿病组（B组，13只），辛伐他汀干预组（C组，13只）。C组予20mg/kg辛伐他汀[8]灌胃，每日给药1次，连续灌胃8周，A组、B组均予等体积生理盐水灌胃。实验14周末1.心脏取血2mL待测空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、谷氨酸氨基转移酶（Glutamate aminotransferase,ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（Aspartateaminotransferase,AST）、高密度脂蛋白胆固醇（High density lipoproteincholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（Low density lipoproteincholesterol,LDL-C）、甘油三酯（Triglyceride,TG）、总胆固醇（Cholesterol,TC）等生化指标。2.取部分肝组织置于液氮中保存，采用RT-PCR法检测TLR4mRNA的表达水平；另取一肝叶予4%多聚甲醛固定，待HE染色观察肝脏形态学变化，免疫组织化学方法检测TLR4、A20的蛋白表达，且应用免疫组化图像分析系统计算其免疫组化评分即IHS[9]。使用spss13.0统计软件处理实验数据，三组数据均进行正态性检验、方差分析，正态分布资料以（X±s）表示，偏态分布资料以四分位数法表示多组比较采用单因素方差分析（ANOVA），组间比较应用SNK检验。相关性分析采用直线相关分析法，均以P＜0.05确定为有统计学意义。结果：1实验6周末实验数据实验组FBG为12.02±2.7mmol/L明显高于对照组的6.16±0.38mmol/L（P<0.05）；对照组空腹胰岛素（Fasting insulin，FINS）为17.82（17.46,18.02）mIU/L与实验组19.02（18.68,19.15）mIU/L比较差异无明显统计学意义（P＞0.05）；实验组ISI0.0046（0.0038,0.0052）低于对照组0.0094（0.0088,0.0095），差别有统计学意义（P＜0.05）。（Table1）2实验14周末实验数据血糖：B组FBG为12.37±3.0mmol/L、C组FBG为11.50±2.0mmol/L，均明显高于A组的5.72±0.43mmol/L，差别均有统计学意义（P<0.05），比较B组、C组的FBG无明显差异（P＞0.05）。肝功、血脂：A组：ALT53.25±5.20U/L、AST184.25±12.5U/L、HDL-C0.71±0.25mmol/L、LDL-C1.23±0.16mmol/L、TG0.78±0.45mmol/L、TC2.40±0.21mmol/LB组：ALT84.4±6.8U/L、AST221±16.30U/L、HDL-C0.53±0.15mmol/L、 LDL-C2.12±0.10mmol/L、TG1.81±0.24mmol/L、TC5.50±0.82mmol/LC组:ALT60.3±10.5U/L、AST207±14.8U/L、HDL-C0.67±0.08mmol/L、LDL-C1.63±0.04mmol/L、TG1.06±0.31mmol/L、TC2.93±0.42mmol/L结果示B、C两组的ALT、TG、TC、LDL-C水平明显高于A组， C组水平低于B组，差别有统计学意义（P＜0.05），三组AST、HDL-C比较差别无统计学意义。（Table2、3）3肝脏病理改变3.1肉眼观察：A组大鼠肝脏呈红褐色，颜色鲜亮，有光泽，肝叶边缘锐利。B组、C组肉眼观察无明显差异均表现为：肝脏体积明显增大，颜色多为浅灰色或褐色，无光泽，边缘圆钝。3.2HE染色：A组大鼠肝细胞排列规则，以中央静脉为中心呈规则放射状排列，肝细胞结构清晰，胞核居中，胞质清晰，偶见炎细胞。B组肝细胞排列结构紊乱，肝细胞体积明显增大、变圆，胞内含大小不一的脂滴，胞核偏向，甚至挤到细胞一侧呈现印戒细胞，肝小叶内现炎细胞浸润，C组虽然也有肝细胞脂肪样变性、排列紊乱、炎细胞浸润等情况，但是较B组明显减轻。（Fig.14-16）4TLR4与锌指蛋白A20蛋白表达情况4.1TLR4TLR4蛋白表达主要表现为胞质内的棕黄色颗粒沉着，A组大鼠肝脏有少量表达，呈浅黄色；B组大鼠肝脏TLR4的含量明显高于A组，深黄；C组大鼠其表达较B组明显减少，但仍多于A组。免疫组化图像分析结果示A组IHS为2.4±1.14；B组IHS为8.3±0.82；C组IHS为5.6±1.8。B组IHS是A组的3.5倍，C组是B组的67.42%，差别具有统计学意义（均P＜0.05）（Table4,Fig.8-10）。相关分析表明，大鼠肝脏TLR4的表达与ALT呈正相关（r=0.87,p＜0.05）4.2锌指蛋白A20A20蛋白表达以胞质出现棕黄色或棕褐色颗粒来判断，免疫组化结果IHS：A组1.8±0.83；B组7.4±1.3；C组4.6±1.6，B组是A组的4.1倍，C组是B组62.16%，差异具有统计学意义（P＜0.01）。（Table4,Fig.11-13）5TLR4mRNA表达TLR4mRNA表达结果以rTLR4表示（rTLR4＝TLR4OD值/β-actin OD值），A组大鼠肝组织TLR4mRNA表达较弱（rTLR4为0.31±0.05），B组大鼠肝组织TLR4mRNA的表达（rTLR4为1.07±0.23）是A组的3.4倍，而C组（rTLR4为0.78±0.35）是B组72.8%，差异均有统计学意义（P<0.05）。（Table5,Fig.7）结论:1TLR4可能参与了糖尿病性肝脏病变的发生、发展。2辛伐他汀可能通过下调肝脏组织中TLR4的表达，发挥对肝脏的保护作用。3A20通过代偿性表达增加，从而减轻炎症反应，减轻肝脏组织损伤。