五指山小型猪(WZSP)是我国特有的优质猪种,其各项生理指标均与人类接近,是理想的实验动物模型。间充质干细胞(Mesenchymal stem cell, MSC)是由中胚层分化而来的一种非造血成体干细胞,它能够在体外贴壁生长,在合适条件下可以大量扩增并分化成为间充质细胞(Mesenchyma cell, MC),并继续分化为骨、软骨、脂肪、成纤维、血管内皮细胞等各种结缔组织细胞。细胞迁移是细胞生物学研究的重要课题之一,其在细胞觅食、伤口痊愈、癌症转移等生理现象均有涉及,因此了解MSCs迁移的迁移机制对开阔MSCs应用新领域有着重要的意义。FSCN1编码的fascin-1蛋白,通常与F-actin蛋白交联,以便来调节细胞膜表丝状伪足、片状伪足和微棘的形成。而这些伪足与微棘等结构对细胞的运动、侵袭、转移等紧密相关,这提示我们FSCN1可能与MSCs细胞的迁移相关。本研究通过干扰五指山小型猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)内FSCN1蛋白的表达,造成基因沉默,旨在进一步探讨FSCN1在骨髓间充质干细胞迁移方面的作用。本实验通过设计合成4个针对FSCN1基因的特异性短发卡结构NA(shRNA)干扰序列并连接载体,采用脂质体介导方式转入细胞,使用荧光定量PCR检测不同shRNA的干扰效果,选出干扰效果最强的一条shRNA。将该shRNA载体进行酶切线性化后,采用电穿孔介导,转入五指山小型猪骨髓间充质干细胞中,并使用G418选择性除去未能成功转染的细胞,从而筛选得到稳定干扰FSCN1表达的细胞系。通过荧光定量PCR、western blot等技术分别从mRNA水平和蛋白水平对稳定转染细胞中FSCN1的干扰效果进行检测。结果表明筛选得到的转入shRNA的细胞系中FSCN1在nRNA和蛋白水平的表达都得到了有效降低。后分别使用划痕愈合法和transwell穿膜法检测干扰细胞系与对照组细胞系迁移能力的差异。结果一致表明,FSCN1基因沉默后,骨髓间充质干细胞的迁移能力明显降低。这说明FSCN1基因与五指山小型猪骨髓间充质干细胞的迁移能力存在正相关关系。本实验筛选出了FSCN1的有效干扰shRNA,通过实验得到了FSCN1稳定干扰细胞系和对照组细胞系,并通过划痕愈合和transwell方法对其迁移能力进行了检测。这不仅验证了Fascin的骨架功能,也为FSCN1的后期研究工作奠定了基础。