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本研究旨在研究油菜秸秆饲料化利用的方法。一是通过筛选提高油菜秸秆饲用价值的白腐菌,探讨其对油菜秸秆的品质及其瘤胃降解的影响;二是通过运用分子技术构建降解木质素能力强的酵母菌株,将香菇漆酶基因在酵母重组、表达,为油菜秸秆开发利用提供技术支撑。试验一:本试验旨在研究白腐菌发酵油菜秸秆对其化学成分及产酶活性的影响。试验采用白腐菌发酵油菜秸秆,测定其发酵10 d、20 d、30 d后油菜秸秆的养分含量变化及木质降解酶活性的变化。结果表明:同对照组相比,经过30 d的发酵,黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium,P.chrysosporium)和香菇菌(Lentinula edodes,L.edodes)降解了油菜秸秆约45%的木质素(lignin),损失了约55%的纤维素(Cellulose);虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora,C.subvermispora)和槭射脉革菌(Phlebia acerina,P.acerina)降解了油菜秸秆部分木质素和纤维素(<30%);P.chrysosporium、L.edodes和C.subvermispora蛋白含量较对照组显著提高(P<0.001)所有白腐菌发酵的油菜秸秆中甲壳素(chitin)含量显著提高(P<0.001)。因此,P.chrysosporium和L.edodes发酵能够明显改善油菜秸秆的营养成分。试验二:本试验旨在研究不同白腐菌发酵油菜秸秆对体外瘤胃发酵的影响。试验采用体外批次培养法,利用四种白腐菌进行固态发酵30 d及对照组的油菜秸秆,体外培养48 h后看对体外瘤胃发酵参数的影响。结果表明:同对照组相比,P.chrysosporium组TVFA含量显著提高(P=0.020),乙酸显著提高(P<0.001);L.edodes和P.chrysosporium组的IVOMD较对照组增大,而C.subvermispora和P.acerina显著降低。P.chrysosporium和L.edodes的Enzymatic OMD较其他组更高(P<0.01)。因此,P.chrysosporium和L.edodes提高了瘤胃体外发酵,C.subvermispora和P.acerina瘤胃发酵受到抑制。试验三:本试验旨在研究不同白腐菌发酵的油菜秸秆对瘤胃降解动力学参数的影响。试验采用瘤胃尼龙袋法在三头瘘管锦江黄牛上进行。结果表明:与对照组相比,L.edodes组油菜秸秆的NDF的快速降解部分增大(P=0.068);P.chrysosporium在所有发酵组中慢速降解部分(B)最大(P=0.004),Kd最小(P=0.004);同对照组相比,L.edodes和P.chrysosporium的不可降解部分(C)分别降低了7.9%和12.7%(P<0.001)。两个发酵组的滞留时间(Lag)不受影响;L.edode和P.chrysosporium发酵的油菜秸秆的NDF的有效消化率(ED)显著提高(P<0.001)。试验四:本试验旨在研究白腐菌的木质素降解酶的异源表达。试验将香菇菌(L.edodes)的漆酶(Laccase)基因通过分子操作技术在乳酸克鲁维酵母(K.lactis)中获得表达。根据NCBI中已报道漆酶基因(Lac1)的序列特征,设计引物对香菇菌基因进行PCR扩增,得到漆酶全基因序列,大小为1503 bp。然后导入乳酸克鲁维酵母表达载体pKLAC2,电转化得到转化子pKLAC2/Lac。经漆酶活检测,转化子成功分泌漆酶活性。