脂肪酶是催化水解长链酰基甘油的一类羧基酯酶。脂肪酶在水相介质和非水相介质中都具有生物催化特性,扩展青霉脂肪酶是目前被广泛使用于催化酯类反应,是我国目前为止唯一规模化生产的脂肪酶。在优化扩展青霉脂肪酶过程中,对扩展青霉脂肪酶进行遗传改造需要经由原核表达这一步骤,可是按照常温诱导出来的扩展青霉脂肪酶是表现不出酶活性的。本研究通过RT-PCR从扩展青霉RNA中扩增得到了脂肪酶基因pel,并与原核表达载体pET-28a(+)共同构建了重组载体pET-28a(+)-pel。以E.coliBL21为表达宿主,在常温(37℃)条件和低温(15℃)条件下对pET-28a(+)-pel进行原核诱导表达,酶活力检测发现低温、长时间诱导可以获得较高的酶活力。分别引入专门用于原核表达的分子伴侣质粒pGro7、pG-Tf2、pTf16、pKJE7和pG-KJE8,仍旧以E.coliBL21为表达宿主,获得了高效功能性表达扩展青霉脂肪酶的重组菌。经低温(15℃)诱导表达后,各重组菌都表现出了脂肪酶活力,其中,含有pGro7、pG-Tf2、pTf16伴侣质粒的酶活力最高,而分子伴侣蛋白GroEL和Tf对于表达产物活性的提高最明显,SDS-PAGE也检测出了PEL和各伴侣蛋白的表达。本研究首次报道了pel基因在原核中的具有功能性的表达,也为高通量筛选随机突变提供了良好的方法。