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背景：肺癌是目前发达国家乃至全世界危害最为严重的恶性肿瘤之一。在我国，肺癌患者每年以26%的速度增长，每年死亡人数高达60万之多。目前一致公认，肺癌与吸烟的关系最为密切。我国现拥有全世界1/3的烟民，80%的男性肺癌和19.3%的女性肺癌都归因于吸烟，所以降低肺癌的发病率和死亡率已成为迫切需要解决的问题。而能否早期发现、早期诊断肺癌成为提高肺癌患者生存率的关键问题。近年来已发现多种肿瘤标志物可用于肺癌的早期诊断，但是专门针对于吸烟人群的肺癌肿瘤标志物的发现却很少。本实验致力于应用蛋白芯片筛选吸烟人群中的肺癌特异性噬菌体克隆，为将来构建诊断芯片从而筛选相关肿瘤标志物奠定基础。方法：用RNeasy Mini Kit提取吸烟型肺癌组织的总RNA，分离纯化mRNA，逆转录合成双链cDNA，经末端修饰、定向EcoRI/HindIII接头连接、接头消化，使其两端分别带有EcoRI和HindIII粘性末端。用Mini Column分离cDNA片段，收集250bp以上的双链cDNA，与T7Select10-3载体连接，体外包装后，得到吸烟型肺癌组织T7噬菌体展示cDNA文库。然后将构建的噬菌体文库进行生物淘洗，并用吸烟型肺癌患者血清、非吸烟型正常人血清和吸烟型正常人血清分别对淘洗后的文库进行大规模的筛选，对所得数据标准化处理，并分别对吸烟肺癌组和非吸烟正常组、吸烟正常组和非吸烟正常组做t检验，以P<0.01为差异极显著，再结合线性回归分析，在吸烟肺癌组和吸烟正常组中都高表达，而在非吸烟正常组中低表达的噬菌体克隆即为所需的吸烟人群中肺癌相关克隆。结果：构建的吸烟型肺癌组织T7噬菌体cDNA文库，经测定，原库库容为1.35×106pfu，扩增后文库滴度为4.4×1010pfu/ml。PCR鉴定从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑，重组率为97%，重组体中91%的插入片段长度>250bp。经所建文库与蛋白芯片结合筛选噬菌体克隆，对吸烟肺癌组和非吸烟正常组进行分析，筛选出158个在吸烟肺癌组中高表达的克隆；对吸烟正常组和非吸烟正常组进行分析，筛选出162个在吸烟正常组中高表达的克隆。最后，从以上两组中选出了82个在吸烟肺癌组和吸烟正常组中都高表达的噬菌体克隆。结论：成功构建了较高质量的吸烟型肺癌组织T7噬菌体cDNA文库，并通过蛋白质芯片筛选出82个吸烟人群中与肺癌相关噬菌体克隆，经验证，这些克隆可以用来构建诊断芯片，并为进一步筛选吸烟人群中肺癌肿瘤标志物，及检测吸烟人群中早期肺癌患者打下基础。