老年UT-B基因敲除和成年UT-A2/UT-B基因敲除鼠肾脏表型研究

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目的:1、研究UT-B基因敲除后老龄鼠肾脏结构和功能改变。2、研究UT-A2/UT-B双基因敲除后,对肾脏尿浓缩功能的影响。方法:1、小鼠基因型鉴定基础上进行实验分组;2、小鼠肾脏形态学变化检测;3、代谢笼实验;4、急性尿素负荷实验;5、慢性蛋白饮食实验;6、18h禁水实验;7、Western-Blot分析肾脏AQPs和UTs蛋白表达;8、免疫组织化学染色检测AQPs和UTs的定位表达。结果:1、UT-B基因敲除鼠形态学变化:30%的52周龄UT-B -/-鼠发生严重的肾积水样病理变化,肾内髓集合管扩张,肾盂受挤压,病理改变来源于肾实质。2、UT-B -/-鼠肾脏功能研究:①正常饮食条件下,老年UT-B -/-鼠与同龄野生鼠相比,出现明显尿浓缩功能障碍,尿量增多,尿渗透压、尿肌酐排出量、血清尿素浓度、尿素清除率则明显降低;②急性尿素负荷实验:给予尿素应激后老年UT-B -/-鼠尿量明显增高,尿渗透压和尿素浓度明显降低,且UT-B基因敲除后尿浓缩功能的缺陷在成年鼠和老年鼠没有明显差异;③18h禁水实验:52周龄UT- B -/-鼠尿离子浓度降低,尿的尿素浓度和血清离子浓度无差异,血清尿素浓度增加,尿渗透压与实验前相比两组均明显增高。3、UT-A2/UT-B -/-小鼠肾脏功能研究:①正常饮食条件下,16周龄UT-A2/UT-B -/-鼠24h尿量明显高于+/+鼠,低于UT-B -/-鼠,血清和尿中尿素浓度变化趋势相同,血清离子浓度均无明显改变;Western-blot和免疫组化结果显示,UT-A2/UT-B -/-鼠AQP2和AQP3蛋白表达均增高,AQP3的表达变化与UT-B -/-鼠无明显差异,AQP1、UT-A1和UT-A3表达无明显差异;②慢性蛋白饮食实验:不同浓度的蛋白饮食并没有引起+/+鼠、UT-B -/-鼠和UT-A2/UT-B -/-鼠尿渗透压的明显改变,UT-B -/-鼠和UT-A2/UT-B -/-鼠尿渗透压均低于+/+鼠,但UT-B -/-鼠降低更明显。尿量无明显差别。结论:1、老龄UT-B -/-鼠发生明显尿浓缩功能障碍,肾脏出现严重的肾积水样病理变化,病理改变来源于肾脏实质,机制有待进一步研究;2、正常条件饮食和慢性蛋白饮食实验结果说明,UT-A2/UT-B -/-鼠和UT-B -/-鼠均出现了明显的尿浓缩功能障碍,尿量增加,尿中尿素水平降低,UT-B -/-鼠尿浓缩功能障碍更为严重。本研究为进一步探讨UT-A2在肾脏尿素循环和浓缩功能中的作用提出了新思路。本研究结果在国内外均未见报道,属于原创性研究发现。
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