当前，病虫害已成为阻碍世界农林业发展不可忽略的一个重要因素，而传统的化学杀虫方式正随着其对环境的巨大破坏作用以及病虫害对化学农药产生的耐抗药性等因素，其使用越来越受到限制。研制和开发广谱高效的生物杀虫剂已成为一个亟待解决的课题。昆虫病原真菌是自然界中存在的一大类能以多种昆虫为寄主、有效控制昆虫种群数量的昆虫天敌。相比于其他生物杀虫剂，昆虫病原真菌具有寄主范围广、对环境和天敌安全、传播范围广、可循环杀虫、资源丰富、害虫不易产生抗性以及主动杀虫作用等优点，在生物杀虫产业中有着广阔的应用前景。然而，昆虫病原真菌杀虫剂在实际使用中，由于受到其致死昆虫速度慢、效果不稳定等因素的影响，造成其市场占有率很低。究其原因，主要是人们对昆虫病原真菌的致病分子机理还不甚了解。已有研究表明，几丁质是昆虫体表的重要组成成分，是昆虫防止机械损伤和抵御病原菌入侵的重要结构。昆虫病原真菌侵染昆虫过程中最重要的一步是对昆虫体壁的穿透，该过程是由真菌孢子在昆虫体壁萌发时所产生的机械压力，和其所分泌的一系列包括几丁质酶在内的水解酶的作用下完成的。为进一步研究昆虫病原真菌的致病分子机理，及利用基因工程技术改良杀虫菌株奠定基础，本论文开展了球孢白僵菌几丁质酶的纯化工作。另一方面，基于抗原抗体的特异性反应，应用免疫技术来研究分析蛋白质的结构、功能、同源性、进化及其基因表达等，已成为一种广为应用的研究手段。为此，本论文还进行了几丁质酶抗血清制备等研究。现将主要研究内容和结果总结如下： 1．产几丁质酶菌株的比较 以胶体几丁质为唯一碳源，利用几丁质酶的可诱导性和分泌性，在27±1℃、170±10rpm的诱 西府农业人学二月三届后上学应用文导条件下培养3d，比较各菌株每6h的几了质酶活性变化情况，从本实验室的保存菌株中筛选出了产田能力相对较高的el习用于实验。2．sbl－l由样几丁质酶活住的诱导曲线 以经筛选得到的Bbll为实验对象，在诱导培养基或含h葡萄糖的诱导培养基中，27士互℃、170士 10po的诱导条件下诱导培养 10d，根据每 12h的几丁质访活性变化情况，得到了其产几了质酶的时间曲线。发现阶11在168h时酶活性可达到最高，并依此设定了纯化工作的诱导时间。同时，研究结果也显示，葡萄糖对几丁质酶的产生具有抑制作用。3．回巴1一互几丁质酶的纯化 诱导培养Bbll得到的发酵波经抽滤、75＄的破获盐析、AcAS4凝胶过滤层析和DEAE－Cellulose离子交换层析等纯化技术处理后，得到了电泳纯的内切几丁质酶。4．几丁质酶性质的鉴定 将经各步纯化操作处理后得到的内切几了质历进行SDS－RAOE电泳，银染后显示为单带，测得其分子量为33kDa。IEF电泳检测得知其p值为5．6，与其它已报道的杀虫真菌几丁酶对比结果表明，该几了质酶为一种新的几了质酶，命名为Blxlll ti．5．BI，c．’．tl几丁质酶抗血清的制备 以纯化得到的Blx’lltl为抗原，按一定的免疫程序经区部、背部、腹腔及耳静脉等途径免疫家兔，6周后获得收价达到l：32的几丁质酶抗血清，该抗血清经流技分级盐析后效价可保持在1：16。