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背景和目的:脂肪干细胞作为最近发现的一类分布广泛,获取容易,分化能力较强的间充质干细胞,正在引起越来越多的关注;相较于骨髓来源的干细胞,脂肪干细胞具有更明显的优势,因此,对于脂肪干细胞,科研工作者们寄予了很大的期望;同时,令人关注的是,脂肪干细胞进入机体后发生的变化,是否具有体外实验那样令人兴奋的效果。 高密度脂蛋白作为人体内维持胆固醇平衡,脂类代谢的一种重要脂蛋白,还具有抗氧化,抗动脉粥样硬化等功能,在保护血管功能,维持机体稳态中发挥不可缺少的作用。有报道证实,高密度脂蛋白对于血管内皮细胞,血管平滑肌细胞等具有促增殖,抗凋亡的保护作用。 本研究聚焦于上述两点,重点探讨了高密度脂蛋白对于脂肪干细胞的影响,针对高密度脂蛋白促进脂肪干细胞增殖这一现象,进行了分子机制上的探究。通过一系列的实验以调查,高密度脂蛋白是否对于脂肪干细胞存在促进增殖的作用。 方法:从健康志愿者血液中分离出血浆,利用密度梯度离心的方法,分离出高密度脂蛋白;分离出小鼠脂肪干细胞并传代培养鉴定,人源脂肪干细胞从美国模式培养物集存库(ATCC)购买;通过细胞水平实验,利用不同浓度的高密度脂蛋白和不同时间点处理两种脂肪干细胞,以MTT和BrdU鉴定细胞增殖效果;通过Western blotting实验,验证相关信号通路关键蛋白质分子和若干细胞周期关键蛋白质分子的表达量变化,说明高密度脂蛋白促进脂肪干细胞增殖作用的分子机制。 结果:通过密度梯度离心法成功分离出高密度脂蛋白;MTT实验和BrdU实验均证实高密度脂蛋白可以促进脂肪干细胞的增殖;Western blotting实验表明,信号通路关键蛋白p-Akt和p-ERK1/2的水平明显上调,细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白E表达量上升,而细胞周期阻抑蛋白p21和p27表达量下调。 结论:高密度脂蛋白可以促进脂肪干细胞的增殖;通过脂肪干细胞膜表面S1P1受体,促进细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白E的表达量上升,并且下调细胞周期阻抑蛋白p21和p27的表达,促进细胞周期进程,进而实现促进细胞增殖的效果。