【摘 要】
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该研究将β7的1.8kb cDNA片亚克隆入原核融合表达载体pGEX-3X,构建成3X-1.8β7重组表达质粒,经IPTG诱导,重组蛋白在E.coli中得到了高效表达.表达产物以包含体形式存在.免疫印
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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该研究将β7的1.8kb cDNA片亚克隆入原核融合表达载体pGEX-3X,构建成3X-1.8β7重组表达质粒,经IPTG诱导,重组蛋白在E.coli中得到了高效表达.表达产物以包含体形式存在.免疫印迹实验表明:搞β7的标准单抗Fib504能识别融合蛋白.以纯化的融合蛋白为免疫原制备了多抗,ELISA检测抗体效价为1:102400.从HL-60细胞系中提取总RNA,根据文献报道的人整合素分子α4亚基的cDNA序列,用RT-PCR分两段(0.8kb,1.2kb)扩增了α4不带信号肽的2.0kbcDNA片段,序列分析发现在第一段中存在一处错义突变,经不同克隆间的拼接去除该突变后,将两片段连接在一起,并将其中的1.7kb cDNA亚克隆入原核融合表达载体pGEX-KG,构建成重组表达质粒KG-1.7α4.经IPTG诱导,α4片段在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物以包含体形式存在,以纯化的融合蛋白为免疫原制备了多抗,经ELISA检测,抗体效价为1:51200.
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