【摘 要】
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【目的】: 胚胎植入是一个复杂的过程,涉及到容受性良好的子宫和健康的胚胎之间的精密对话。凋亡,是一种可维持内环境稳定、为了更好的适应生存环境而主动进行的细胞死亡过程
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【目的】: 胚胎植入是一个复杂的过程,涉及到容受性良好的子宫和健康的胚胎之间的精密对话。凋亡,是一种可维持内环境稳定、为了更好的适应生存环境而主动进行的细胞死亡过程。胚胎着床之时,子宫内膜上皮发生迅速凋亡以便于胚胎植入,而在胚胎植入之后,由基质细胞分化而成的蜕膜细胞的凋亡则对胚胎植入的进程和妊娠的成功与否至关重要。程序性细胞死亡因子4(Pdcd4)是一种高度保守的凋亡相关蛋白,并且已知其通过抑制基因的转录和翻译来抑制肿瘤的发生、发展和侵袭。课题组前期研究成果显示,PDCD4在正常小鼠早孕期子宫内膜中低表达有利于基质细胞蜕膜化,而在临床人类先兆流产和稽留流产子宫内膜样本中的表达显著升高。这提示若子宫内膜基质细胞中Pdcd4异常升高对于基质细胞蜕膜化必然产生不利影响。本研究通过在基质细胞中过表达Pdcd4,以期探明Pdcd4异常升高对基质细胞蜕膜化的影响。为了解细胞凋亡在基质细胞蜕膜化中的作用打下一定的研究基础。 【方法】: (1)构建过表达质粒载体(pCMV6-Pdcd4/pCMV6-vector),在感受态大肠杆菌中扩增和提取,再利用细胞核膜转染技术使过表达载体入核表达,使实验组细胞中PDCD4的表达量较对照组显著升高(P<0.05)。 (2)使用子宫内膜基质细胞原代培养、荧光定量 PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction),免疫印迹(Western blotting),流式细胞术等方法检测PDCD4过表达对子宫内膜基质细胞凋亡以及蜕膜化的影响。 【结果】: (1) PDCD4在实验组基质细胞中的表达显著高于对照组(P<0.05),子宫内膜原代基质细胞过表达模型建立成功。 (2) PDCD4过表达后,子宫内膜基质细胞的凋亡率增加且内在线粒体凋亡途径中的相关因子及促凋亡因子的表达相应升高。 (3) PDCD4过表达对未分化基质细胞的蜕膜化建立过程有抑制作用(P<0.05),但对蜕膜化的维持过程有一定的抑制作用,但未发现统计学差异。 【结论】: PDCD4的过表达会通过增加小鼠子宫内膜基质细胞的凋亡而对其蜕膜化过程的建立和维持产生抑制作用,提示了PDCD4的异常表达在胚胎植入中发挥着重要作用,然而其具体机制仍需进一步研究。
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