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背景:肺癌是我国发病率和死亡率极高的恶性肿瘤之一,最常见的类型为肺腺癌,其中非小细胞肺癌约占所有肺癌的85%,在过去30年中,非小细胞肺癌确诊时通常为晚期,且预后较差,5年肺癌生存率约为16%。因此,迫切需要探究新的分子靶向治疗方案。研究报道TRIB2参与白血病、卵巢癌、肝癌等多种癌症的发生。本课题组在以往研究中发现TRIB2与肺腺癌的发生发展有关,且可能与NF-κB经典途径有关,NF-κB由P50、P65组成,并以异二聚体或同型二聚体复合物的形式来发挥作用。但是尚未见报道TRIB2影响NF-κB经典途径的具体机制。目的:研究TRIB2在肺腺癌中的作用机制是否与NF-κB经典信号途径有关,寻找阻止肺腺癌发生发展的基因靶点。方法:1、转染pcDNA-TRIB2和siR-TRIB2至肺腺癌细胞株,在生物学行为方面,采用MTT、克隆形成、流式细胞术、Trans-well法检测其对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响。在分子机制方面,运用Western blot、荧光素酶报告基因实验检测TRIB2对NF-κB经典信号通路的调控。2、在293T细胞中转染Flag-TRIB2,运用蛋白质免疫共沉淀实验检测TRIB2与IκB-α及泛素化相关分子的相互作用。在A549细胞中转染Flag-TRIB2、GFP-TRIB2、HA-IκB-α,通过免疫荧光共定位检测TRIB2、IκB-α、RFWD2之间的相互作用。3、为进一步检测TRIB2与IκB-α RFWD2相互作用的具体结构域,根据TRIB2的结构特点将其分段,并将TRIB2各段过表达载体转染至293T细胞,采用蛋白质免疫共沉淀的方法检测TRIB2与IκB-α、RFWD2相互作用的具体结构域。4、采用MTT、克隆形成、流式细胞术、实时无标记细胞分析技术(RTCA)检测在肺腺癌细胞株中抑制RFWD2表达的同时,TRIB2对细胞增殖、凋亡及迁移的影响;采用Western blot实验检测抑制RFWD2表达的同时TRIB2对NF-κB经典信号通路相关分子表达的影响。5、运用裸鼠移植瘤实验在体内检测TRIB2、RFWD2在肺腺癌细胞中的作用。结果:1、研究发现TRIB2可以促进肺腺癌细胞的增殖和迁移,抑制肺腺癌细胞的凋亡;而敲低TRIB2结果与之相反。TRIB2抑制NF-κB经典信号通路。2、免疫共沉淀结果显示TRIB2、IκB-α、RFWD2三者之间存在一定的相互作用,且免疫荧光共定位结果显示,三者存在共定位区域。3、分段免疫共沉淀结果显示,含有假激酶结构域及域羧基端的TRIB2与RFWD2存在相互作用;仅含有假激酶结构或同时含有氨基端的TRIB2与IκB-α存在相互作用。4、在肺腺癌细胞中抑制RFWD2的表达会逆转TRIB2对细胞增殖、迁移、凋亡的作用及对NF-κB经典信号通路的影响。5、裸鼠移植瘤结果显示敲低TRIB2或RFWD2后移植瘤体积减小、重量减少、增长速度减慢;而过表达TRIB2后结果与之相反;在肺腺癌细胞株中过表达TRIB2的同时抑制RFWD2的表达,与过表达TRIB2组相比,移植瘤体积减小、重量减少、增长速度减慢。结论:TRIB2能明显促进肺腺癌细胞的增殖和迁移且显著下调NF-κB的表达,该作用机制可能是TRIB2通过RFWD2负调控NF-κB信号通路。因此,RFWD2有望成为临床治疗肺腺癌的新靶点。