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正常分化机制失控是细胞癌变原因之一,细胞丧失了其正常生理功能,表现去分化特征,从而成为不衰老的永生细胞。因此研究细胞分化机制对于揭示肿瘤形成机理是至关重要的。本实验室前期研究发现组蛋白甲基化酶SET9与Purα之间存在直接相互作用。由于组蛋白甲基化在细胞分化中有重要作用,因此Purα功能的研究对于揭示细胞分化机制有重要意义。Purα是一个在进化中高度保守的多功能蛋白质,可与特定序列单链或双链DNA和RNA结合。其在细胞内具有重要的调控功能,包括调控DNA复制,基因转录激活和抑制,mRNA转运和翻译,细胞周期和致癌性转化以及DNA修复等。Purα可与多种调控蛋白组成复合体而行使功能,其多功能的特性与其相互作用蛋白质组分密切相关。目前已报道的与 Purα相互作用的蛋白质有 Rb,E2F-1,Sp1,YB1,cyclinT1/Cdk9,cyclinA/Cdk2,这些蛋白质在细胞周期和转录调控中有重要作用。因此可见研究与Purα相互作用的蛋白质对于揭示Purα功能具有重要意义。本实验构建了 N-TAP-PURA载体,可表达N端融合串联亲和纯化(TAP)标签的Purα融合蛋白。运用TAP技术分离Purα蛋白质复合体,然后经质谱(肽质量指纹图谱)分析鉴定出与Purα特异性结合的38种候选蛋白质。按功能划分这些蛋白质可分别归属于以下几类:第一类为与mRNA转运和翻译相关的蛋白质,包括12种核糖体蛋白(RP),8种核不均一核糖体蛋白(hnRNP),2种mRNA前体的剪接因子,2种多聚腺苷酸结合蛋白,以及IGF2BP1蛋白和CSDE1蛋白。以上几种蛋白质均参与mRNA转运和翻译。第二类为与DNA损伤修复相关的蛋白质,包括6种解旋酶,ILF3,G3BP1和DNAbindingproteinA。以上几种蛋白质均具有DNA解旋功能,参与DNA损伤修复。第一和第二类蛋白与Purα的功能一致。另还鉴定出RasGTPase-activating-likeprotein(IQGAP1),此蛋白质参与细胞增殖和分化,这与Purα的功能也具有相关性。目前还未有专门针对于Purα蛋白质复合体研究的报道,已报道的与Purα相互作用的蛋白质均是通过其他蛋白复合体研究时发现的,且其研究所选用的细胞系集中在神经,小鼠,血细胞,与本实验所选用的人胚肾细胞293T不同。因此本文得到的蛋白质复合体组分对于揭示Purα功能,构建Purα相互作用蛋白网络提供了线索。本实验还构建了 Purα表达量下调的293T和Hela细胞株,并通过MTT实验检测Purα表达量下调对于Hela细胞生长活力及其对于甲基磺酸甲酯(MMS)敏感性的影响。结果显示Purα表达量下调对于Hela细胞生长活力没有明显的影响,但其使Hela细胞对MMS敏感性略有增强,这与Purα参与DNA修复的功能一致,为进一步对于Purα功能及作用机制的研究奠定了基础。