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目的:本实验观察枸橼酸坦度螺酮对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR)尾动脉收缩压的影响,探讨枸橼酸坦度螺酮对血管内皮功能的修复作用;研究枸橼酸坦度螺酮降压的分子机制,进一步观察枸橼酸坦度螺酮对于心、脑、肾等脏器是否有保护作用,为临床治疗提供科学的实验数据与理论基础。方法:采用随机数字表法将40只9周龄雄性SHR分为SHR模型组(10ml×kg-1×d-1蒸馏水,n=8),左旋氨氯地平对照组(简称左旋组,2.5mg×kg-1×d-1左旋氨氯地平,n=8),枸橼酸坦度螺酮高剂量组(简称高剂量组,40mg×kg-1×d-1,n=8),枸橼酸坦度螺酮中剂量组(简称中剂量组,20 mg×kg-1×d-1,n=8),枸橼酸坦度螺酮低剂量组(简称低剂量组,10mg×kg-1×d-1,n=8)。另设8只同周龄正常血压WKY大鼠(Wistar-Kyoto rats)为正常组(简称WKY组,10ml×kg-1×d-1蒸馏水,n=8)。采用全自动无创血压测定系统BP-600A测量大鼠初次给药前以及第一次给药后30min、60min、90min、120min、180min、240min的尾动脉收缩压,并连续给药至28d,分别测定连续给药后7d、14d、21d、28d的血压,每次测量时间为给药后1h。连续治疗28d后禁食、自由饮水24小时,腹主动脉取血,分别收集血浆和血清,硝酸酶还原法测定血清一氧化氮(Nitric oxid,NO),酶联免疫分析(ELISA)法检测血浆内皮素(Endothelin,ET)、肾素(Renin)、血管紧张素Ⅱ(Angiotensin II,AngⅡ),去甲肾上腺素(Noradrenaline,NE)的水平。取左肾,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,rt-q PCR)方法检测ACE、AT-1R基因的表达情况;另取右肾用10%福尔马林固定,苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色检测病理变化。取出心脏,用10%福尔马林固定,用于HE染色检测病理变化。大鼠断颈开颅,快速取出脑组织,士学位论文每组大鼠随机选4只分离大脑蓝斑等,rt-q PCR检测蓝斑α1、α2、β1、β2基因表达;另外4只取出整个脑组织,10%福尔马林固定,用于HE染色检测病理变化。数据分析釆用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析,组间两两比较方差齐时采用LSD法,结果以“均数±标准差”(x±SD)表示,P(27)0.05被认为有显著差异。结果:(1)给药前,与WKY正常组相比,各SHR组收缩压(SBP)明显升高(P<0.01);单次给药30min后,与模型组相比,枸橼酸坦度螺酮高、中、低剂量组SBP具有不同程度的下降,且均有显著差异(P<0.05或P<0.01),且高剂量组SBP下降更为显著(P<0.01),并且降压效果持续到给药后240min(P<0.05或P<0.01);左旋组给药后血压持续下降,并可以稳压到240min(P<0.01或P<0.05)。与左旋组相比,高剂量组的降压作用与其相当(P>0.05),中低剂量组降压效果相对较弱。连续多次给药7d、14d后,与模型组相比,枸橼酸坦度螺酮高、中剂量组SBP均有显著降低(P<0.01或P<0.05);连续给药到28d,低剂量组降压不明显,而高、中剂量组仍有显著降压效果(P<0.01)。与左旋组相比,高剂量组的降压效果相当(P>0.05),但中、低剂量组降压较果较弱。(2)SHR模型组大鼠血清NO含量显著低于WKY组(P(27)0.01);左旋组,高剂量组大鼠血清NO含量较SHR模型组明显升高(P(27)0.01);中、低剂量组NO含量的升高与模型组相比无显著性差异(P>0.05)。(3)SHR模型组大鼠血浆ET含量较WKY组明显升高(P(27)0.05);与SHR模型组相比,左旋组,高剂量组大鼠血浆ET含量均显著降低(P(27)0.05);中、低剂量组也有所降低,但差异无统计学意义。(4)与WKY组相比,SHR模型组大鼠血浆Renin含量显著升高(P(27)0.01);左旋组、高、中、低剂量组血清Renin含量相对于模型组明显降低(P(27)0.01或P(27)0.05),差异均有统计学意义。(5)SHR模型组大鼠血浆NE含量与WKY组相比明显升高(P<0.05),与SHR模型组相比,左旋组、高、中、低剂量组NE含量均明显降低(P<0.01或P<0.05),差异有统计学意义。(6)SHR模士学位论文型组大鼠血浆AngⅡ含量显著高于WKY组(P(27)0.05),左旋组、高剂量组大鼠血浆AngⅡ含量均较SHR模型组显著降低(P(27)0.05);中、低剂量组其含量也低于模型组,但差异无统计学意义。(7)与WKY组相比,SHR模型组肾组织ACE、AT1R m RNA表达明显升高,坦度螺酮高中低剂量组ACE、AT1R m RNA表达较模型组均有所降低,但差异均无统计学意义。(8)与WKY组相比,SHR模型组大脑蓝斑ɑ1-AR,β1-AR基因表达明显升高,坦度螺酮高、中、低剂量组两基因表达较模型组有所降低,但差异均无统计学意义;与WKY组相比,SHR模型组ɑ2-AR基因表达较低,各剂量组用药后,基因表达有所升高,但差异无统计学意义;各组β2-AR基因表达无明显趋势。(9)心、脑、肾HE染色显示坦度螺酮各剂量组均有不同程度的心脑肾保护,其中以高剂量对心、肾的保护最为明显。结论:1.枸橼酸坦度螺酮对SHR尾动脉收缩压表现出较好的降压效果,高剂量治疗28d达到稳定期,与左旋氨氯地平组降压效果相似。2.枸橼酸坦度螺酮可能通过调节血管内皮舒缩因子NO和ET释放平衡,改善高血压进程中血管内皮功能障碍。3.枸橼酸坦度螺酮可能通过调节RAS系统Renin、AngⅡ,及NE含量,达到抗高血压的作用。4.枸橼酸坦度螺酮对肾脏ACE、AT1R基因调控作用不明显,但可能通过交感神经调节作用而降低血压。5.枸橼酸坦度螺酮能有效改善SHR心、肾病理形态结构,发挥心、肾保护作用。