从武汉市九峰森林公园附近采集含油污土样18份,经平板粗筛、摇瓶发酵复筛,获得一株脂肪酶酶活力为7.0U/mL的菌株,编号为26-2。经表型和16S rRNA序列分析（GenBank登录号:DQ789596）及系统发育分析将其鉴定为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）26-2。应用单因子试验和正交试验对荧光假单胞菌26-2产脂肪酶发酵条件进行了快速优化。首先应用单因子试验确定荧光假单胞菌26-2产脂肪酶最适碳源和最适氮源分别为淀粉和酵母提取物。在此基础上通过L9 （34）正交试验,考察了淀粉、酵母提取物、橄榄油和硫酸镁等4个因素对产酶的影响,获得优化的培养基组成。最后通过单因子试验确定最适发酵温度和最适起始pH。试验获得的优化培养条件为:淀粉2.0%,酵母提取物3%,硫酸镁0.05%,K₂HPO₄0.2%,橄榄油0.2%,pH7.0,发酵温度30℃,培养60h后,酶活达到15.0U/mL。荧光假单胞菌26-2脂肪酶的最适pH为9.0,最适温度为50℃;Ca2+对酶活具有促进作用,而EDTA等则明显抑制酶活。通过PCR方法克隆了荧光假单胞菌26-2的脂肪酶基因。该基因开放式阅读框（ORF）为1854bp,编码617个氨基酸残基。与邻近种属脂肪酶基因序列的多重比较表明,该基因属于脂肪酶家族I.3。经EcoRI/NotI酶切,将其克隆到酵母表达载体pPIC9K上,构建成质粒pPIC9K-lipA,并导入毕赤酵母GS115中,初步获得脂肪酶诱导表达的基因工程菌。该菌在摇瓶发酵条件下,3d后发酵液酶活可达5.U/mL。