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肾病综合征(nephrotic syndrome, NS)是由多种病因引起的肾小球疾病的一组临床综合征,其不是一个独立的疾病,临床上具有四大病征：蛋白尿、低蛋白血症、高脂血症和水肿,其中以大量蛋白尿为最基本特征。现代临床上主要采用激素治疗,但副作用较大且易复发。中医药对其辨证论治,疗效确切,尤以益气活血法作用突出。本论文首先综述了肾病综合征的病理生理认识、临床治疗及动物模型的研究进展,重点概述了引起肾病综合征的关键因素——肾脏足细胞分子nephrin、podocin、CD2AP的结构和作用功能,三者相互连接、相互作用,在维持肾小球足细胞结构、维护肾小球正常滤过功能起着重要作用。同时概述了中医对NS的病因病机及辨证论治,证见脾肾阳虚型或气虚并挟血瘀,常以益气活血法为治则。本课题根据中医治疗NS用药统计,以益气药和活血药各自的经典代表药——黄芪、丹参进行组方(简称“芪丹方”),观察芪丹方对NS大鼠的药效作用并探讨其治疗机理,为临床治疗NS提供实验依据,拓展NS治疗手段,为探索中医药高效低毒治疗方案提供新思路。实验方法本课题通过制备阿霉素NS模型大鼠,以芪丹方对其进行干预,以动物一般情况、尿蛋白、血压、耳廓微循环、血清白蛋白(TP)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)及肾脏病理组织学等为观察指标,评价芪丹方对NS大鼠的作用效果；同时测定各组大鼠血清一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量；Trizol法提取各组大鼠肾皮质总RNA, RT-PCR法测定NS大鼠肾脏足细胞分子nephrin、podocin、CD2AP mRNA的表达变化,探讨芪丹方对NS大鼠的作用机理。芪丹方对NS主要起到益气活血作用,其活血化瘀、增强免疫、抗炎及抗疲劳等辅助药效对治疗NS变有相关作用,为进一步探明芪丹方治疗NS的药效作用,本课题还开展芪丹方对NS辅助药效实验研究：应用肾上腺素配合冰浴法制备大鼠血瘀模型,以耳廓微循环、血清NO、SOD、Scr及TC、TG、HDL、LDL为指标考察芪丹方的活血化瘀作用；采用碳粒廓清法考察芪丹方对小鼠免疫系统的影响；二甲苯致小鼠耳肿胀及毛细血管通透性实验考察芪丹方抗炎作用效果：小鼠游泳法考察芪丹方抗疲劳作用及对运动疲劳小鼠血清肌酸激酶(CK)的影响。实验结果1芪月方对NS大鼠的治疗作用芪丹方能显著改善NS大鼠精神、活动、摄食量、毛色等状况；能明显减轻NS大鼠24h尿蛋白(P<0.01),改善肾功能；可降低NS致高血压(P<0.05)；芪丹方高(12.34g/kg)、中(6.17g/kg)、低剂量(3.09g/kg)能明显改善NS大鼠微循环障碍(P<0.01或P<O.05)；芪丹方能明显降低NS大鼠血清总胆固醇(P<0.01)；芪丹方高、中剂量能降低NS大鼠血清甘油三酯(P<0.05)；芪丹方能提高NS大鼠血清高密度脂蛋白水平(P<0.05)；芪丹方高、中、低剂量能明显降低NS大鼠血清低密度脂蛋白水平(P<0.01或P<0.05)；芪丹方高、中、低剂量能显著改善NS大鼠血浆蛋白水平(P<0.01或P<0.05)；芪丹方高、中、低剂量组能显著降低NS大鼠血清BUN水平(P<0.01或P<0.05)；芪丹方高、中、低剂量能显著降低NS大鼠血清Scr水平(P<0.01或P<0.05)；芪丹方各治疗组均能不同程度改善NS大鼠肾脏病理状况,恢复肾小球结构。2芪丹方对NS大鼠的作用机理芪丹方高、中、低剂量能显著能提高NS大鼠血清NO水平(P<0.01或P<0.05)；芪丹方高、中、低剂量能显著提高NS大鼠血清SOD活性(P<0.01或P<0.05)；芪丹方高、中、低剂量能显著降低NS大鼠血清MDA水平(P<0.01或P<0.05)：NS大鼠nephrin、podocin、CD2AP的缺失与大量蛋白尿的发生密切相连,RT-PCR结果显示模型组大鼠nephrin、podocin、CD2AP mRNA均呈低表达,而芪丹方能显著性提高NS大鼠肾脏足细胞分子nephrin mRNA的表达(P<0.05),同时极显著提高NS大鼠podocin、CD2AP mRNA在肾脏的表达(P<0.01),与尿蛋白的下降呈正相关。3芪丹方对NS的辅助药效研究芪丹方能明显改善血瘀模型大鼠耳廓微循环障碍状况(P<0.01)：芪丹方能明显提高血瘀大鼠血清NO水平(P<0.01)；芪丹方高(12.34g/kg)、中(6.17g/kg)、低剂量(3.09g/kg)能明显提高血瘀大鼠血清SOD活性(P<0.01或P<0.05)；芪丹方高、中、低剂量能明显降低血瘀大鼠血清总胆固醇含量(P<0.01或P<0.05)；芪丹方能明显降低血瘀大鼠血清甘油三酯水平(P<0.01)；芪丹方还能明显提高血瘀大鼠血清高密度脂蛋白含量(P<0.01)；芪丹方高、中、低剂量能显著降低血瘀大鼠血清低密度脂蛋白含量(P<0.01或P<0.05)。芪丹方高(24.66g/kg)、中(12.33g/kg)、低剂量(6.165g/kg)能显著提高小鼠免疫功能(P<0.05或P<0.01)；芪丹方高、中、低剂量能明显抑制二甲苯致小鼠耳肿胀(P<0.05或P<0.01)；芪丹方高、中、低剂量能明显抑制醋酸对小鼠腹腔毛细血管通透性(P<0.05或P<0.01)；芪丹方高、中、低剂量能明显提高小鼠负重游泳时间(P<0.05或P<0.01),芪丹方高、中、低剂量能明显降低运动疲劳小鼠血清肌酸激酶(CK)水平(P<0.05或P<0.01)。结论芪丹方能减少NS大鼠尿蛋白,提高血浆蛋白水平,减少高凝状况,降低血清BUN、Scr含量,改善NS症状；同时能提高血清NO水平、SOD活力,增强NS大鼠机体抗病能力；提高肾脏足细胞分子nephrin、podocin、CD2AP mRNA的表达,促进足细胞结构的恢复,提高对血浆蛋白的滤过能力；并能增强免疫、抗炎能力,提高机体抗疲劳能力,对血瘀情况有良好的改善作用。综上所述芪丹方能起到确切的益气活血作用,这与其改善肾脏足细胞结构,减少蛋白尿的发生和改善NS高凝状况有密切关系：芪丹方对NS疾病的治疗作用可能与其首先改善肾脏足细胞分子结构,恢复屏障功能有关,同时NS的发病机制与肾脏足细胞分子也有密切关联。