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microRNAs(miRNA)是一种内源性的长22nt的单链小分子RNA,是一组不编码蛋白质的短序列RNA。miRNA通过与靶基因mRNA 3’非翻译区(3’Untranslated regions,3’UTR)的结合,在转录后水平降解mRNA或抑制翻译,调节基因的表达。miRNA与靶基因结合的关键部位称为“种子区域”(seed regionmiRNA 5’末端开始2—7个核甘酸),与miRNA3’UTR通过碱基配对结合。单核甘酸多态性是(SNPs)人类可遗传的变异中最常见的一种,前期研究已经证实miRNA靶位点序列中,存在有功能的SNPS。那么位于miRNA靶标位点的SNP会不会影响miRNA的功能及靶基因的表达呢?从2007年开始,部分学者开始从事这方面的研究,最近的研究已经证实了某些miRNA靶标位点的SNP与乳腺癌、结肠癌、肺癌、胃肠癌发病有关。然而,miRNA靶位点的单核酸多态性对鼻咽癌的发病是否有影响,与疾病发生、发展、预后的关系目前仍知之甚少,因此本研究的目的是通过生物信息学预测、筛选鼻咽癌易感基因3’UTR潜在的microRNA靶位点,并发掘靶标区域SNP位点,结合病例一对照研究,探讨miRNA靶标位点基因多态性与鼻咽癌发病的关系。首先通过文献回顾,我们总结了鼻咽癌的七大特征所涉及到的82个易感基因:持续生成新生血管、逃避凋亡、生长信号的自足性、抗生长信号的不敏感性、无限增殖潜能、组织侵袭与转移、肿瘤相关的炎症等。在NCBI数据库中下载了82个候选基因3’UTR的SNPs,利用miRanda,PicTar,TargetScans,和RNAfold webserve网站预测SNP位点的microRNA靶标和自由能,以与“种子”序列严格碱基互补配对的位点作为候选microRNA靶位点。最终在82个基因里找到220个SNPs存在于潜在的miRNA靶位点中,挑选在鼻咽癌中高表达,3’UTRSNP等位基因频率(MAF＞0.05)且miRNA结合自由能相对较小的9个基因(EGFR,COX2,CCNE1,hTERT,MMP2,MMP9,NF-κB VEGF and WNT3)进行实验验证。实验首先随机选取12例患者和12例对照DNA,通过直接测序法筛选9个候选基因3’UTR的SNPs,结果筛选出EGFR rs884225,CCNE1 rs3218073 andMMP2 rs7201 3个SNPs用于下一步实验。然后,采用病例-对照的研究方法,选取广东地区167例鼻咽癌患者和171例正常对照为研究对象,针对已经筛选出来的SNPs进行批量PCR扩增和测序分型。研究结果表明:在鼻咽癌总体样本中CCNE1基因多态位点(rs3218073)中,携带T等位基因的基因型TC+TT(OR＝1.585;95%CI＝1.023～2.458 P＝0.046),及等位基因T(OR＝1.464,95%CI＝1.012～2.118;P＝0.042)显著增加了鼻咽癌患病风险。进一步分层分析表明,杂合子变异型TC(OR＝1.959,P＝0.043)和等位基因T(OR＝2.123,P＝0.006)在原发肿瘤T3-T4分期中分布明显,此外,基因型TC(OR＝1.959,P＝0.043)和等位基因T(OR＝2.123,P＝0.006)与较晚临床分期(Ⅲ-Ⅳ期)有关。MMP2 rs7201位点基因型分析,选取了116例鼻咽癌患者和143例正常对照,MMP2 rs7201多态性与鼻咽癌易感性不存在关联,(杂合子变异型AC OR＝0.69.95%CI＝0.404～1.124,p＝0.209;等位基因C OR＝0.769,95%CI＝0.509～1.16,p＝0.135)。以167例鼻咽癌患者和171例为研究对象分析EGFR多态位点(rs884225)基因型分布,EGFR rs884225多态性与鼻咽癌发病风险无统计学差异(杂合子AG OR＝1.375,95%CI＝0.850～2.224 p＝0.194;纯合子变异型GG OR＝0.844,95%CI＝0.460～1.550 p＝0.584:等位基因G OR＝0.969,95%CI＝0.714～1.315,p＝0.839)。上述结果提示,生物信息学预测miRNA-151靶基因CCNE1 3’UTR区miRNA结合位点的(rs3218073)多态性,携带T等位基因与鼻咽癌易感关联程度较高,并且与肿瘤分期有关,miRNA-151功能与rs3218073多态性的关系,还需进一步实验证实。