miR-27a作为前列腺癌早期诊断标志物的初步研究

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目的:检测前列腺炎、前列腺良性增生、前列腺癌中雄激素、PSA、MiRNA-27a的含量,并分析三者的相关性,探讨MiRNA-27a含量与前列腺癌各临床病理特征之间的关系。材料和方法:收集男性前列腺炎患者18-65岁(标记为A组对照组,60例)、良性前列腺增生患者年龄≥50岁(标记为B组实验1组,60例)、确诊前列腺癌(I-IV)患者年龄≥50岁(标记为C组实验2组,34例)手术前血清,以及前列腺癌患者手术后血清,各组患者均为初治,既往未行放化疗,年龄≥50岁,肿瘤分期按AJCC最新标准执行,前列腺炎患者分别行血常规、生化、PSA、腹部超声、直肠指诊查证无异常,并且既往没有恶性肿瘤史;运用RT-PCR检测血液和组织标本中的MiRNA-27a,以及采用放射免疫试剂盒检测雄性激素,ELISA技术检测PSA,分析三者之间的相关性以及与临床特征之间的相关性。VCaP前列腺癌细胞和素抑制后VCaP前列腺癌细胞:均使用含10%胎牛血清的DMEM培养基,37℃,5%CO2培养箱培养,培养至稳定传代处于对数生长期,利用激素抑制激素处理VCaP前列腺癌细胞;采用MTT细胞计数法检测激素抑制后VCaP前列腺癌细胞后细胞的增值率;采用Annexin-V/PI法流式细胞术检测激素抑制后前列腺癌细胞后细胞的凋亡率;细胞划痕实验检测激素抑制后VCaP前列腺癌细胞后细胞的运动能力;Transwell试验检测激素抑制后前列腺癌细胞后细胞的迁移侵袭能力;RT-PCR检测激素抑制后VCaP前列腺癌细胞后MiRNA-27a的表达。结果:1.前列腺癌患者(I-IV期)较之非前列腺癌患者(包括正常人和前列腺炎、前列腺增生)MiRNA-27a有明显改变(P<0.01);2.在前列腺癌患者(I-IV期)中,MiRNA-27a与年龄(|r|=0.7541)、TNM分期(|r|=0.9663)、前列腺肿瘤大小(|r|=0.9216)相关系数均大于0.7,说明MiRNA-27a与以上指标之间有高度的线性正相关关系;3. PSA处于灰区(4ng/ml≤PSA≤10ng/ml)中的MiRNA-27a含量在前列腺癌组和非前列腺癌组有统计学差异;4.对雄激素依赖性前列腺癌细胞株VCap进行激素含量干预实验,抑制其MiRNA-27a的表达,结果表明细胞生长明显受到抑制,增值率降低,凋亡率上升,运动能力下降,侵袭性下降。结论:1.在前列腺癌患者(I-IV)中,MiRNA-27a浓度和肿瘤分期及前列腺癌组织的大小有正相关,在前列腺癌和非前列腺癌患者之间MiRNA-27a有明显的统计学差异;2.对PSA处于灰区的前列腺患者而言,MiRNA-27a是一种灵敏度和特异性均较好的新指标,在有限的病例里,MiRNA-27a的改变和病理结果符合率达到100%;3. MiRNA-27a的含量变化可以提高PSA处于灰区的无症状前列腺癌患者的早期发现;4.抑制雄激素(睾酮),可明显降低激素依赖性前列腺细胞Vcap的MiRNA-27a的含量,其增殖速度和侵袭性明显降低,细胞周期处于抑制的非增殖状态。
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