论文部分内容阅读
目的:獭兔又称力克斯兔,是人们对家兔突变个体进行选育而培育出来的一个品种。由于獭兔皮毛品质极佳,特别是毛色多样绚丽多彩深受消费者的喜爱。大量的研究表明毛色由体内的色素决定,主要由酪氨酸源性色素(黑色素及其衍生物)决定。真黑色素与褐黑色素的含量及比例影响毛色的形成,同时它们的时空表达也影响哺乳动物毛色的明暗和花纹形成。本实验诣在探究影响黑色素形成的相关基因(MITF、TYR、TYRP1、TYRP2、SILV和小鼠P基因)与獭兔毛色的关系。方法:通过基因序列扩增测序的方法对獭兔MITF、TYR、TYRP1、TYRP2、SILV和P基因在不同品种(品系)獭兔的变异特征和多态性进行了一系列的分析;从mRNA水平(应用RT-PCR与Q-PCR方法)检测了上述6个基因在不同毛色(白色、黑色、青紫蓝色)獭兔皮肤组织中的相对表达量。将獭兔毛色相关基因的多态性位点与上述基因在皮肤组织中相对表达量相,分析目的基因与獭兔毛色的关系,以期为探明獭兔毛色形成的调控机制提供理论依据。结果:1.多态性分析(1)TYR基因第2外显子发现2个多态位点:SNP1(885 G>A),SNP2(886A>C)。SNP1为同义突变,SNP2为有义突变,导致284号的脯氨酸突变为苏氨酸(CCC→ACC)。卡方检验未发现这两个突变位点基因型与獭兔毛色相关。(2)P基因第2外显子存在1个多态位点即:SNP(670 A>G),该突变为同义突变,未改变氨基酸序列。(3)TYRP1基因第2外显子发现3个多态位点:SNP1(570 A>G),SNP2(581T>A),SNP3(582 T插入)。TYRP1基因编码区570 bp的A>G突变使得186号的色氨酸(Tryptophan)变成了终止子。TYRP1基因编码区581 bp处发现的T>A突变导致190号的酪氨酸(Tyrosine)变为苯丙氨酸(Phenylalanine)。TYRP1基因编码区582bp处碱基T的插入使得191号及其以后的氨基酸序列发生改变。卡方检验未发现獭兔毛色与TYRP1基因第2外显子570bp处突变位点基因型相关(P>0.05)。而TYRP1基因第2外显子581bp和582bp处突变基因型与白色、黑色与青紫蓝3种毛色极显著相关(P<0.01)。2.组织表达分析(1)MITF、TYR、TYRP1、TYRP2、SILV和小鼠P基因在獭兔皮肤组织中均表达。(2)黑色獭兔皮肤组织中MITF基因的mRNA相对表达量最高,白色獭兔皮肤组织中MITF基因mRNA相对表达量最低。且黑色獭兔皮肤组织MITF基因mRNA表达量极显著高于白色、青紫蓝獭兔(P<0.01);白色与青紫蓝色獭兔皮肤组织MITF基因mRNA表达量差异显著(0.010.05)。(4)青紫蓝獭兔皮肤组织中TYR基因的mRNA相对表达量最高,白色獭兔皮肤组织中TYR基因mRNA相对表达量最低。且青紫蓝獭兔皮肤组织中TYR基因mRNA表达量显著高于白色和黑色(0.010.05)。(5)黑色獭兔皮肤组织中TYRP1基因的mRNA相对表达量最高,白色獭兔皮肤组织中TYRP1基因mRNA相对表达量最低。且黑色獭兔皮肤组织中TYRP1基因mRNA表达量极显著高于白色、青紫(P<0.01);白色与青紫蓝獭兔皮肤组织TYRP1基因mRNA表达量差异不显著(P>0.05)。(6)黑色獭兔皮肤组织中SILV基因的mRNA相对表达量最高,白色獭兔皮肤组织中SILV基因mRNA相对表达量最低。且黑色獭兔皮肤组织中SILV基因mRNA表达量极显著高于白色、青紫蓝獭兔(P<0.01);白色与青紫蓝獭兔皮肤组织SILV基因mRNA表达量差异不显著(P>0.05)。(7)黑色獭兔皮肤组织中TYRP2基因的mRNA相对表达量最高,白色獭兔皮肤组织TYRP2基因mRNA相对表达量最低。且黑色獭兔皮肤组织中TYRP2基因mRNA表达量极显著高于白色、青紫蓝(P<0.01);白色与青紫蓝獭兔皮肤组织TYRP2基因mRNA表达量差异也极显著(P<0.01)。结论:6个与毛色相关的基因可能均参与毛色的形成及调控。其具体影响机制还需进行深入研究;具有关键突变位点的TYR、TYRP2和P基因可能是獭兔毛色形成过程中的关键因子,可作为研究毛色形成机制的候选基因。