论文部分内容阅读
本文假设成体骨髓中存在一类处于非粘附状态的、悬浮的、与造血细胞类似的多潜能骨髓基质干细胞,它们虽具有贴壁潜能,但比贴壁的基质干细胞更原始,称为骨髓来源的非粘附基质干细胞(non-adherentbonemarrow-derivedstromalcell,NA-BM-SC)。这类细胞能够经血液循环转运到全身各器官,在特定的微环境下贴壁,增殖并分化为各器官的终末分化细胞,参与正常组织的再生及损伤组织的修复。
为了验证这一假设,从以下三个部分进行实验研究:
第一部分采用反复转移非贴壁骨髓细胞(NA-BMC)体外培养法,取6周龄小鼠股骨和胫骨来源的骨髓总细胞培养10-18天,每天转移一次非贴壁骨髓细胞至新的培养皿,即“pouroff”,至少4次。对一天后贴壁的细胞加入新鲜培养液继续培养。实验结果证实了不仅总BMC可以产生成纤维细胞克隆形成单位,非贴壁骨髓细胞也能产生CFU-F;地塞米松可以抑制CFU-F的形成效率,而1.25(OH)2D3则可以部分拮抗地塞米松的抑制作用。为了确定NA-BMC来源的基质干细胞(NA-BM-SC)是否具有自我更新能力和多分化潜能,采用5-溴脱氧尿核苷(Bromodeoxyuridine,BrdU)掺入法、免疫细胞化学法和流式细胞仪法证实了NA-BM-SC不但具有自我更新能力,而且在体外不同条件下培养,能分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和神经胶质细胞。
第二部分采用维生素D受体(vitaminDreceptor,VDR)基因敲除小鼠,经致死剂量照射后,移植野生型小鼠的NA-BM-SC,通过VDR基因的示踪作用,观察NA-BM-SC是否具有造血重建和参与辐射损伤修复的作用。
第三部分采用遗传性Ⅰ型佝偻病的动物模型1α羟化酶基因敲除小鼠,经致死剂量照射后,移植野生型小鼠的NA-BM-SC,观察能否纠正其遗传缺陷。