视网膜新生血管形成(retinal neovascularization,RNV)是年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)、糖尿病视网膜病变及视网膜静脉阻塞等多种眼底疾病导致视力不可逆,严重丧失的主要原因之一。其发病机制非常复杂,目前为止,尚无统一说法,许多学者对眼底视网膜新生血管性疾病的发病机制和治疗方法提出了很多新观点,如血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)的作用等。抗VEGF药物Avastin在临床应用中日益增多,且已取得令人鼓舞的结果。Avastin由美国生物科技公司基因技术公司(Genentech)研制,是人源化抗VEGF重组鼠单克隆抗体,其分子结构主要由人的框架区IgG1和鼠单克隆抗体抗原结合互补决定区组成,能阻止VEGF与血管内皮细胞表面受体结合,从而抑制内皮细胞有丝分裂,阻碍新生血管形成。本试验旨在成功建立兔眼视网膜新生血管动物模型、观察玻璃体腔内注射Avastin治疗兔眼视网膜新生血管的疗效,为临床治疗提供依据。材料与方法选取健康有色家兔为试验对象,应用电凝器分别对兔双眼视盘两侧集束状视网膜血管进行电凝,建立兔RNV模型。电凝2W后,经FFA检查和病理组织切片光镜检查证实有视网膜新生血管形成,选取36只(72眼)兔视网膜新生血管眼,随机分为治疗组和对照组。治疗组玻璃体腔内注射Avastin 1.25mg/0.05ml,对照组玻璃体腔内注射BSS 0.05ml。注射后1W、2W及4W各处死动物12只,摘除眼球,10只制作石蜡切片,两只行电镜检查。免疫组织化学检查对VEGF因子和FⅧ-Rag蛋白表达进行灰度值检测。正常眼(8眼)为正常对照组。结果1.兔双眼视盘两侧视网膜血管电凝2周后,经FFA检查和病理组织切片光镜检查证实有视网膜新生血管形成。电凝兔眼80眼,排除外形正常眼底未见视网膜新生血管形成者6眼,电凝处巩膜穿孔者2眼,本试验视网膜新生血管模型成功率为90%。2.FFA显示和眼底彩照:治疗组用药1W后荧光渗漏消失,2W及4W复查FFA未见新生血管复发,荧光渗漏消失;对照组1W、2W及4W FFA检查造影早期(动脉前期或动脉期)即显示荧光迅速渗漏,后期形成高荧光;治疗组用药1W后眼底彩照显示视网膜新生血管消退;2W及4W观察眼底,未见新生血管复发。对照组1W、2W及4W观察眼底时发现新生血管范围扩大。3.免疫组织化学检测:色素兔眼视网膜新生血管动物模型玻璃体腔内注射Avastin 1.25mg/0.05ml后,1W、2W及4W时与对照组相比,免疫组织化学检测结果显示:治疗组VEGF因子表达的灰度值与对照组相比明显减少,FⅧ-Rag蛋白表达的灰度值与对照组相比明显减少。4.光镜和电镜显示:注射后1W、2W及4W时与对照组相比,治疗组光镜切片中突破视网膜内界膜的毛细血管内皮细胞数目较对照组降低。观察注射后组织学和超微结构无明显异常。结论1.应用电凝器电凝兔眼视盘两侧集束状视网膜血管的方法,2周后可以成功建立视网膜新生血管模型。2.FFA显示和眼底彩照检查可以有效观察到Avastin治疗前、后新生血管的消退情况。3.组织学检查,显示Avastin在治疗视网膜新生血管的同时,光镜和电镜下没有观察到视网膜毒性的明显证据。4.抗VEGF药物Avastin玻璃体腔内注射治疗实验性RNV,疗效显著,可作为临床视网膜新生血管有效的治疗方法。