RNA用于体液鉴别的方法学建立及其法医学应用研究

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目的为了对犯罪现场体液斑迹同时进行组织来源和个体识别的鉴定,建立一种准确、灵敏、快速的新方法。本文从基因表达的组织特异性入手,筛选出包括外周血、月经血、精液、阴道分泌物、唾液在内的常见体液特异性的mRNA标识,通过RNA判断体液来源以及DNA进行个体识别。方法根据实验要求,分别收集外周血、月经血、精液、阴道分泌物、唾液样本;比较并确立同时提取RNA和DNA的方法;选取了用于体液组织来源识别的7对引物,扩增产物在300bp以下,片段长度相似则采用不同荧光标记用以区分,统一了扩增条件,使7对引物可以在相同参数下扩增,用毛细管凝胶电泳法对RNA逆转录扩增产物和DNA扩增产物进行检验;应用所建立的方法分别通过对外周血、月经血、精液、唾液、阴道分泌物进行验证。结果1确定采用TRIzol法进行RNA和DNA的同时提取。2根据目标样本的序列,筛选多对引物,探索优化扩增体系,使扩增条件能够同时满足多对引物的需要。3对外周血、月经血、精液、阴道分泌物、唾液样本进行验证,均得到可靠结果。4五种体液除了均表达管家基因18S、GAPDH外,外周血表达SPTB;月经血表达MMP-7、SPTB、HBD-1;精液表达PRM-2;阴道分泌物表达HBD-1;唾液表达STATH。结论1本课题所建立的是一种对体液判别有效、实用的方法。2根据RNA在不同类型、功能的细胞或组织中的表达模式存在差异,确立通过检测RNA表达水平来进行体液组织来源鉴别的方法。提取RNA进行组织来源鉴定的同时进行DNA个体识别的检验。3采用RNA作为研究目标进行体液识别的标识,为此研究领域提供了一个新的思路。
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