1.背景与目的变异链球菌是口腔主要的致龋菌之一。药物杀灭变异链球菌一直是龋病防治工作的重要辅助手段,但细菌容易形成耐药性。随着生物工程的不断发展,运用益生菌替代疗法得到越来越多的关注。细菌替代疗法就是使用无害或者低毒力的菌株放入宿主的菌群中,防止特定病原体定植,从而起到预防、治疗疾病的目的。龋病替代疗法的候选菌种,除了变异链球菌本身外还有血链球菌。本研究通过逐渐降低培养基ph构建血链球菌耐酸株,研究血链球菌耐酸株的适应性耐酸能力及其相关生理变化。并通过平板实验、PCR等技术观察血链球菌耐酸株拮抗变异链球菌的能力,弄清血链球菌、变异链球菌在龋病发病过程中相互关系,为探索龋病替代疗法提供微生物学基础。2.方法2.1在逐渐降低培养液ph值的培养液中培养血链球菌,直至ph降至5.0。获得的菌株命名为血链球菌耐酸株(SN)。2.2比较血链球菌及其耐酸株在ph7、ph5培养液中的生长曲线。2.3测量血链球菌及其耐酸株、变异链球菌及其耐酸株的致死ph值。2.4测量氯霉素对血链球菌耐酸株适应性耐酸能力的影响。2.5通过平板实验检测血链球菌及其耐酸株与变异链球菌在ph7和ph5环境中的拮抗作用。2.6通过荧光定量PCR反应比较血链球菌及其耐酸株的耐酸基因DnaK、GroEL的变化。3.结果3.1经过亚致死ph培养的血链球菌耐酸株无论在正常环境还是在酸性环境生长均有优势。3.2血链球菌耐酸株较血链球菌致死ph降低了1.3,且有66.59%能在原致死ph存活。3.3当含有氯霉素时,血链球菌耐酸株不能在原致死ph存活。3.4血链球菌耐酸株对变异链球菌的竞争排斥作用更强。3.5血链球菌耐酸株相关耐酸基因GroEL、DnaK表达上调。4.结论4.1成功构建血链球菌耐酸株。4.2血链球菌耐酸株较血链球菌适应性耐酸能力明显提高。4.3血链球菌适应性耐酸能力的提高与应激蛋白的合成有关。