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目的基于ERK5信号通路研究失荅剌知丸对脑缺血再灌注大鼠脑细胞抗凋亡的影响,探究其对缺血性脑血管病神经损伤的保护作用及其机制。方法将238只SD大鼠分成空白组、假手术组、模型组、尼莫地平组,失荅剌知丸组,其中失荅剌知丸组根据给药浓度又分成高、中、低剂量组,共计7大组;每组根据提取脑组织样本的时间又分成1 d、3 d、7 d组,每小组共计14只大鼠;以上除空白组、假手术组外,其余组均建立脑缺血再灌注模型;各组每天同一时间灌胃,1天2次;通过参照Garcia JH评分规则在建模后1d、3d和7d全面测评大鼠神经功能缺损的改善情况。免疫荧光法观察ERK5的阳性计数情况;TUNEL法观察神经细胞凋亡情况;Western blot法分析检测活化后的P-ERK5的磷酸化水平;RT-PCR检测大脑缺血侧ERK5基因的相对表达量。结果1.神经功能缺损评估测试结果(1)空白组、假手术组各时间点神经功能基本无明显缺损,饮食、活动等状况良好(P>0.05);(2)模型组及药物组各时间点与空白组和假手术组各时间点对比差异显著(P<0.01);(3)各药物组相较于模型组各时间点差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);(4)尼莫地平组和失荅剌知丸低、中、高组各时间点比较神经功能改善无明显差异(P>0.05);(5)失荅剌知丸组内比较:低剂量组和中剂量组、中剂量组和高剂量组比较神经功能改善均无明显差异(P>0.05),但低剂量和高剂量组比较差异显著(P<0.01);(6)各药物3d组和7d组神经缺损有改善,但差异不明显(P>0.05),两者相较于1d组差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。2.ERK5免疫荧光结果(1)空白组和假手术组两组间差异无统计学意义(P>0.05);其余各组阳性细胞数均高于空白组和假手术组,差异有显著性(P<0.01);(2)各药物组各时间点阳性细胞数与模型组比较差异显著(P<0.01);(3)尼莫地平组和失荅剌知丸中剂量组各时间点阳性细胞数的表达无明显差异(P>0.05),与失荅剌知丸低、高剂量组各时间点比较差异有统计学意义(P<0.05);(4)失荅剌知丸组内比较:低剂量组各时间点相较于中、高剂量组差异显著(P<0.01),中剂量和高剂量组各时间点比较差异不明显(P>0.05),其中高剂量组表达最高;(5)各药物1d组和3d组比较表达无明显差异(P>0.05),和7d组比较差异显著(P<0.01),3d组和7d组比较差异有统计学意义(P<0.05),其中7d组阳性细胞数表达最高。3.脑缺血再灌注后大鼠细胞凋亡结果(1)与空白组和假手术组相比,大鼠缺血侧可见明显的凋亡细胞(P<0.01或P<0.05);(2)与各时间点的模型组比较,药物组凋亡细胞数均有明显减少(P<0.01)(3)尼莫地平组各时间点和失荅剌知丸中剂量组比较无明显差异(P>0.05),与失荅剌知丸低、高剂量组比较有统计学意义(P<0.01或P<0.05);(4)失荅剌知丸组内比较:不同剂量组之间凋亡细胞数量的差异明显不同(P<0.01),其中高剂量组减少最明显;(5)各药物组1d组凋亡细胞最多,7d组凋亡细胞最少(P<0.01)。4.Western Blot检测结果(1)空白组和假手术组比较无明显差异(P>0.05);(2)模型组和各药物组与空白组和假手术组相比有显著差异(P<0.01);(3)各药物组各时间点磷酸化水平上调均高于模型组(P<0.01或P<0.05);(4)尼莫地平组各时间点和失荅剌知丸中剂量之间无明显差异(P>0.05),和低、高剂量组之间存在显著差异(P<0.01);(5)失荅剌知丸组内比较:各剂量组磷酸化水平差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),其中高剂量组上调最明显(P<0.01);(6)各药物组1d组磷酸化水平上调不明显,7d组上调明显(P<0.05)。5.RT-PCR检测ERK5相对表达量结果(1)空白组和假手术组相对表达量比较无明显差异(P>0.05);(2)模型组和各药物组相对表达量均高于空白组和假手术组(P<0.01或P<0.05);(3)各药物组的相对表达量显著高于模型组(P<0.01);(4)尼莫地平组各时间点和失荅剌知丸中剂量组比较表达量无明显差异(P>0.05),与低、高剂量组比较表达量存在差异(P<0.01或P<0.05);(5)失荅剌知丸组内比较:各剂量组之间表达量存在差异(P<0.01或P<0.05),其中高剂量表达量最高(P<0.01);(6)各药物组1d组表达量最少,7d组表达量最高(P<0.01或P<0.05)。结论1.大鼠脑缺血再灌注后经失荅剌知丸干预神经功能缺损得到一定程度的恢复,其中7天组改善最明显。2.随着失荅剌知丸干预时间的延长,脑缺血再灌注大鼠缺血侧中的凋亡细胞呈下降趋势,其中1天组凋亡数量最多,7天组凋亡数量最少。3.失荅剌知丸可使脑缺血再灌注大鼠缺血脑组织中ERK5蛋白激酶的表达上调,这可能与激活ERK5信号通路从而发挥抗细胞凋亡,保护神经元的机制有关。