大青杨遗传转化体系的建立及其LbDREB基因的遗传转化

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:vertra
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
大青杨是我国东北林区特有的乡土树种,生长快、材质优良,是造纸及胶合板材极好的原料。但由于目前东北林区无或极少皆伐迹地,多为土壤干旱瘠薄、地力衰退严重的退耕还林地,急需大量耐旱、抗寒、速生、优质的大青杨新品系。本研究以大青杨为材料,进行外植体选择、基本培养基选择、分化培养基和生根培养基配方筛选,建立大青杨遗传转化体系:采用根癌农杆菌介导法,将抗旱基因二色补血草LbDREB转入大青杨中,并进行分子检测及耐旱、耐寒能力测试研究,主要实验结果如下:1、建立大青杨的遗传转化体系:外植体取材部位为苗高为50 cm左右苗木的第二茎节,分化培养基为1/2MS+0.5 mg l-1 6-BA+0.1 mg l-1 NAA,生根培养基为1/2MS;转基因大青杨受体材料为大青杨形态学上端的第三片叶子和形态学上端三个茎节。2、通过卡纳霉素浓度梯度试验确立叶片分化对卡那霉素的临界浓度为50 mg 1-1;以大青杨组培苗叶片为受体材料,通过农杆菌介导法导入LbDREB基因,转化率为2.67%;对获得的40抗性愈伤进行了PCR扩增检测,其中17株有特异性扩增条带产生,而阴性对照没有任何扩增条带,初步证明了LbDREB基因已被导入到大青杨基因组中:将17株PCR阳性植株进行RT-PCR检测,结果显示有6株显阳性,说明这6株在转录水平上表达;形态学观察表明,RT-PCR检测阳性的植株都有矮化现象,其他植株的没有矮化现象。3、用转基因叶片,茎节、根在分化培养基上培养进行扩繁试验,发现根系较转基因植株的其他器官分化能力强;不同长度的根分化能力也不同,3-5cm、6-8cm、1-3cm的主根系分化能力较强,增殖系数分别达到15.87、11.6、9.67;子代不定芽,进行PCR检测,发现转基因植株必须通过多次分化筛选之后才可以以微繁的方式增殖;但是茎段中腋芽发育出来的子代,能够保持其基因型不变,增殖系数较低,2.9~3.5之间;石蜡切片表明多细胞共同发育成芽,最先得到的芽为嵌合体。4、通过-20℃胁迫、NaCl、NaHCO3、甘露醇胁迫实验的相关研究发现:大青杨转LbDREB基因植株抗冻性、耐盐、耐碱均强于对照植株。5、不给水胁迫、15%PEG胁迫、甘露醇胁迫下研究叶绿素及荧光参数测定发现:矮化植株E3号转基因植株叶绿素含量低于野生型和不矮化A1号转基因植株。荧光参数Fv/Fm、Fv/Fo、qP、ETR也低于野生型和不矮化A1号转基因植株。但是NPQ、qN高于野生型。所以在胁迫状态下E3号转基因植株抗光氧化能力高于野生型和A1号转基因植株。
其他文献
期刊
现代医学证明,用手抓头按摩,对于消除疲劳、改善头皮营养状况、促进新陈代谢、调节皮肤分泌等,都具有一定的意义。除用于养生保健外,这种按摩法还可防治神经衰弱、高血 Mode
期刊
常吃四样菜能助长寿日本饮食研究专家松长绘菜,通过研究日本冲绳“超长寿”胜地——直味村发现,造成现代人老化的危机不是营养不良,而是营养不均衡。动物性脂肪、糖分、盐分
期刊
在首次发现松突圆蚧和枯斑拟盘多毛孢共寄生(co-parasitism)现象的基础上,以揭示松突圆蚧入侵暴发机制为目标,通过野外系统定位调查和室内测试,研究了松突圆蚧和枯斑拟盘多毛
美味狗肉有禁忌用狗肉烹调的菜肴瘦而不腻,香味浓郁,容易被人体消化和吸收。冬令食用狗肉可使虚劳肾亏、脾胃虚寒、气血不足等状况得到改善;对老年人体弱虚寒、胸腹胀满、膝
期刊
期刊
说到保健品,维生素堪为最佳。请看科学家为你带来的最新信息——◆VA:保护呼吸道◆世界卫生组织确认,VA缺乏大大增加了发展中国家儿童肺炎、腹泻的发病率,包括中国在内。缺乏
期刊
本文以黄顶菊为材料,在不同浓度NaCl(CK、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%)胁迫条件下,测定不同NaCl胁迫下黄顶菊盆栽苗的形态生理及生化特性。结果如下:1.NaCl处理明显抑
经济和社会的快速发展导致自然资源需求量的急剧增加,使城市发展面临巨大的人口、资源与环境压力,由此产生影响经济、社会可持续发展和生态安全问题。本研究区为长沙市市区,
期刊