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研究背景与目的:尤文肉瘤约占所有原始恶性骨肿瘤的10%,占所有儿童恶性肿瘤的3%,主要原发于骨骼和肌肉,也可见于软组织。约25%的患者在诊断时可发现已有转移,其中50%转移至肺,其次是骨、骨髓,转移通常预示着预后不良。尤文肉瘤的治疗方法包括化疗,放疗,局部手术切除等,目前这些治疗方法可使局限性尤文肉瘤患者的生存率达到70%,但对于转移性,复发性和难治性的尤文肉瘤,效果欠佳,其患者预后不良。对于尤文肉瘤的临床有效治疗有待更多基础科研的进一步探索。PSME3又被称为REGγ,PA28γ,是11s蛋白酶体激活因子家族的一员。PSME3可以通过泛素非依赖和ATP非依赖途径降解多种蛋白如SRC-3、P16、P19、P21,从而影响细胞周期的调控,在细胞和人类疾病中扮演着重要的角色。研究报道PSME3在甲状腺癌、乳腺癌和直肠癌的血清中高表达,参与多种癌症相关通路条件,在癌症的发生发展中发挥重要作用,但PSME3在尤文肉瘤中的作用与机制尚无文献报道。因此我们探索PSME3在尤文肉瘤发生发展中的作用与机制,希望为尤文肉瘤的诊疗提供一个新的方向。研究内容和方法:1、通过瞬转然后WB和qPCR检测来观察尤文肉瘤细胞SKNMC对PSME3的敲减与过表达处理是否敏感。2、通过包病毒构稳转株,验证其敲减效果,进一步研究PSME3敲减对尤文肉瘤细胞SKNMC增殖、迁移功能的影响。3、探寻Hippo信号通路是否参与PSME3对尤文肉瘤细胞SKNMC的调控。4、采用裸鼠皮下荷瘤来验证PSME3敲减对SKNMC在体内水平是否发挥同样作用。5、对尤文肉瘤患者组织标本进行免疫组化染色并根据PSME3表达水平分组,分析PMSE3表达水平与患者预后之间的关系。结果:首先,我们通过瞬转后WB和qPCR检测,发现尤文肉瘤细胞株SKNMC对PSME3的敲减与过表达处理敏感。其次,我们包慢病毒构建稳转株并利用WB检测和qPCR检测来验证其敲减效果,证明PSME3敲减尤文肉瘤稳转细胞株构建成功;然后通过MTT实验和克隆形成实验,发现PSME3敲减抑制尤文肉瘤细胞SKNMC的增殖;通过Transwell小室迁移实验和细胞划痕实验,发现PSME3敲减抑制尤文肉瘤细胞SKNMC的迁移。采用WB检测发现PSME3敲减后lats1的表达水平显著增加,验证尤文肉瘤细胞中PSME3对Hippo信号通路具有调控作用。接着,我们构建裸鼠皮下荷瘤模型,发现PSME3敲减后形成的肿瘤无论数量还是体积都小于对照组;进一步组织取蛋白样WB检测,证明PSME3在哺乳动物体内可以调控Hippo通路影响尤文肉瘤细胞增殖。最后,我们对人的尤文肉瘤组织标本进行免疫组化染色,发现PSME3表达水平与尤文肉瘤患者生存时间呈负相关。结论:基于以上研究结果,我们认为PSME3在尤文肉瘤的发生发展中发挥着重要作用,PSME3敲减可以抑制体外尤文肉瘤细胞SKNMC的增殖和迁移能力。机制初步探索证明在尤文肉瘤细胞中PSME3对Hippo信号通路具有调控作用。其在哺乳动物体内同样具有调控作用,通过敲减PSME3可以抑制尤文肉瘤细胞SKNMC的生长。人尤文肉瘤组织免疫组化染色发现PSME3表达水平与尤文肉瘤患者生存时间呈负相关。这些研究结果将为尤文肉瘤的诊疗提供新的方向。