玉米秸秆生产球毛壳菌素A的两段式发酵条件初步研究

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农业上每年产生大量的秸秆,当中包含有纤维素、半纤维素和木质素等多糖,作为重要的能源物质,可被微生物分解供其生长繁殖。对秸秆直接进行焚烧或丢弃会造成环境的污染,也让秸秆资源被浪费。本研究利用玉米秸秆为发酵底物,以出芽短梗霉和球毛壳菌为出发菌株,采用两段式发酵的方式来生产目的产物球毛壳菌素A。在获得目的产物的同时,实现秸秆资源化,提高秸秆的经济效益,还可有效缓解玉米秸秆焚烧带来的大气污染等环境问题,以达到变废为宝的目的。本研究使用实验室已保存的出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)和球毛壳菌(Chaetomium globosum),通过光学显微镜以及扫描电镜观察菌株形态,确定菌株生长状态良好且不存在污染现象。生长曲线显示出芽短梗霉生长对数期为36-96 h,球毛壳菌为36-72 h。复合菌群构建前对两株真菌进行生长对峙实验。结果显示,两株真菌没有明显拮抗作用。根据预实验结果,球毛壳菌能利用出芽短梗霉发酵过的上清液进行生长繁殖产生球毛壳菌素A。通过对比发现,接入了球毛壳菌后的发酵液中的普鲁兰多糖含量明显低于只接种了出芽短梗霉的发酵液,初步判断球毛壳菌能利用出芽短梗霉产生的普鲁兰多糖,进行目的产物的生产。初步复合菌群发酵产目的产物产量为1.376 mg/g,比单球毛壳菌发酵高。单因素实验确定最佳水平为:秸秆含量65 g/L,出芽短梗霉发酵时间为5 d,球毛壳菌发酵时长15 d,温度28℃,p H6.0,球毛壳菌接种量为4%,出芽短梗霉接种量为0.6%,转速180 rpm。后续通过响应面实验结果分析,模型极其显著。各因素最佳的条件为:球毛壳菌发酵时长14.62 d、温度28.03℃、p H 5.78、接种量4.18%,预测产量比值2.635。据响应面预测结果,应用各因素最佳的条件进行发酵实验,得出优化前后比值的平均值为2.593,与预测值偏差小,最终产量为3.569mg/g。根据抑菌能力测试可知,复合菌群能够分解利用玉米秸秆,且产生的目的产物对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)具有明显抑制作用。从纤维素等成分含量的测定以及扫描电镜图片的结果也证明复合菌群能够分解利用玉米秸秆,且复合菌群对玉米秸秆的腐解优于单球毛壳菌发酵,且优化后的较优化前的发酵液具有更优的腐解情况,经过优化后的发酵体系发酵的玉米秸秆中半纤维素含量比未处理的减少26.64%、纤维素减少44.8%、木质素减少30.5%。
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