【摘 要】
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【目的】近年来,赛加羚羊数量的大规模减少使人们更加意识到保护赛加羚羊的重要性,亟需更多的基础研究深入了解赛加羚羊在其生态位的重要作用。赛加羚羊适宜生活在干旱与半干旱荒漠中,在极端条件下生存需要其体内保持强大的水稳态。肾脏水通道蛋白参与水分运输和浓缩尿液,其中水通道蛋白2(AQP2)、水通道蛋白4(AQP4)和水通道蛋白8(AQP8)在促进电解质平衡、酸碱平衡以及水盐平衡中发挥着重要作用。以山羊为对
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【目的】近年来,赛加羚羊数量的大规模减少使人们更加意识到保护赛加羚羊的重要性,亟需更多的基础研究深入了解赛加羚羊在其生态位的重要作用。赛加羚羊适宜生活在干旱与半干旱荒漠中,在极端条件下生存需要其体内保持强大的水稳态。肾脏水通道蛋白参与水分运输和浓缩尿液,其中水通道蛋白2(AQP2)、水通道蛋白4(AQP4)和水通道蛋白8(AQP8)在促进电解质平衡、酸碱平衡以及水盐平衡中发挥着重要作用。以山羊为对照,对不同年龄赛加羚羊肾脏水通道蛋白的表达情况进行研究,与肾小体形态学结构指数相结合,有助于了解其体内水通道蛋白的特质以及变化情况,尝试解释其生长发育过程中对干旱与半干旱环境的适应性以及体内水平衡的调节机制。从转录组水平深入探究赛加羚羊生长发育时期显著富集的差异表达基因,并筛选与水通道蛋白相关的信号通路中差异表达基因的变化,深度分析其在干旱与半干旱环境中的适应机制。【方法】组织学方法观察肾小球,统计和比较赛加羚羊肾小球相关结构指数。免疫组化检测赛加羚羊肾脏AQP2、AQP4和AQP8表达位置及定量统计分析。免疫印迹检测赛加羚羊肾脏AQP2、AQP4和AQP8蛋白水平表达量。q RT-PCR检测赛加羚羊肾脏AQP2、AQP4和AQP8转录水平表达量。转录组测序分析赛加羚羊肾脏差异表达基因的功能富集和信号通路富集,并筛选和统计与AQP2、AQP4和AQP8相关的差异表达基因数量。【结果】幼年赛加羚羊肾小球体积为(1.60±0.12)×10~6μm~3,成年赛加羚羊肾小球体积为(4.13±0.15)×10~6μm~3,幼年山羊肾小球体积为(1.31±0.06)×10~6μm~3,成年山羊肾小球体积为(2.36±0.10)×10~6μm~3。成年赛加羚羊肾小球体积显著高于其幼年(P<0.001)和成年山羊(P<0.001)。进一步研究肾小球体积与鲍曼囊体积之间的关系,发现赛加羚羊的肾小球体积与鲍曼囊体积具有高相关性,成年赛加羚羊的相关性(r=0.9688,P<0.0001)高于幼年(r=0.9525,P<0.0001)。赛加羚羊和山羊肾脏AQP2、AQP4和AQP8在皮质肾小管和髓质集合管中都有定位,结合免疫印迹结果,发现成年赛加羚羊AQP2表达量显著高于其幼年(P<0.001)和成年山羊(P<0.001);成年赛加羚羊AQP4表达量显著高于其幼年(P<0.05),且与同龄山羊之间无显著性差异;成年赛加羚羊AQP8表达量显著高于其幼年(P<0.05),且与同龄山羊之间无显著性差异。q RT-PCR检测AQP2、AQP4和AQP8转录水平表达情况,此结果与蛋白水平结果一致。成年赛加羚羊三种水通道蛋白转录表达量均显著高于其幼年(P<0.01)。对赛加羚羊肾脏进行转录组测序,结果显示,赛加羚羊有10,122个差异表达基因,其中上调5,507个,下调4,615个;山羊有1,530个差异表达基因,其中上调1,019个,下调511个。二者差异表达基因的功能富集和信号通路富集有差异,筛选并统计与AQP2、AQP4和AQP8相关信号通路的差异表达基因,赛加羚羊分别有17个、51个和34个差异表达基因,山羊分别有3个、20个和17个差异表达基因,赛加羚羊与AQP2、AQP4和AQP8相关信号通路的差异表达基因数量多于山羊。【结论】赛加羚羊发育时期肾小球体积逐渐增大,并且体积大于同龄山羊。赛加羚羊肾小球体积与鲍曼囊体积具有高相关性,可能存在最适比使其达到高效滤过率。赛加羚羊生长发育时期AQP2、AQP4和AQP8均在皮质肾小管以及髓质集合管有表达,AQP2、AQP4和AQP8在蛋白水平和转录水平表达一致,均有上调趋势,有助于增加肾小管对水分的重吸收,为认识其对干旱与半干旱环境的适应性提供结构和分子基础。赛加羚羊发育过程中存在差异表达基因,且与AQP2、AQP4和AQP8相关信号通路的差异表达基因数量多于山羊。赛加羚羊的耐旱适应一定程度上可通过水通道蛋白相关信号通路共同调控转录水平与蛋白水平表达,完善其耐旱分子机制。
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