α-半乳糖苷酶可以催化α-1,6连接的末端半乳糖残基靶向水解半乳寡糖,在食品工业、动物饲料、生物医学和生物质加工方面具有巨大的潜力。为丰富食用菌α-半乳糖苷酶基因库以及开发五台山台蘑的应用潜力,本研究利用离子交换层析和凝胶过滤层析对鳞杯伞子实体中的α-半乳糖苷酶进行纯化,得到了一种分子量为50 k Da的α-半乳糖苷酶,命名为CSG。CSG的纯化倍数为891.46倍,得率为0.71%,比活为54.78 U/mg。通过肽段比对,发现其为GH 27家族的α-半乳糖苷酶。CSG的最适pH为3.0,最适温度为50°C。在pH 2.2-7.0的酸性范围内和4-30°C中低温环境下有较好的稳定性。Mn2+、Cd2+、Cu2+对该酶具有较高的抑制作用。半乳糖和蜜二糖对该酶的抑制类型为混合型抑制。化学修饰剂N-溴代琥珀酰亚胺显著削弱了CSG的活力,碳二亚胺对CSG具有显著的激活作用。该酶具有良好的蛋白酶抗性,对瓜尔豆胶、赤槐豆胶和棉子糖家族寡糖均表现出良好的降解能力。为提高其在实际生产中的应用价值,选择海藻酸钠包埋法和壳聚糖交联法固定化CSG,通过比对固定化酶和游离酶的最适pH、pH稳定性、最适温度、温度稳定性、保存时间及对豆浆中低聚糖的水解作用和操作稳定性等性质,探究适宜于CSG的固定化载体。结果表明:两种固定化方法酶活性保持率都达到了50%以上,且固定化酶的温度稳定性、pH稳定性、保存时间相比游离酶都有提升;比对壳聚糖交联法和海藻酸钠包埋法两种固定化方法,前者固定化后的酶温度稳定性、pH稳定性及操作稳定性要优于后者,但保存时间和对豆浆中低聚糖的水解效率要低于后者,两种固定化酶重复使用3次后低聚糖水解率在85%以上,相比于海藻酸钠,壳聚糖更适宜作为CSG的固定化载体。