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目的:基于16S rDNA高通量基因测序法,探索健脾合剂对腹泻型肠易激综合征脾虚证(Diarrhea irritable bowel syndrome,IBS-D)肠道菌群的干预作用,并观察其临床疗效。方法:1.实验研究:将清洁级幼龄ICR雄性小鼠48只随机分为四组(n=12),并建立IBS-D脾虚证小鼠模型(3n=36),造模评价成功后,空白组和IBS-D脾虚证组分别予双蒸水(10ml/kg)、复合乳酸菌组予复合乳酸菌(0.26g/kg)、健脾合剂组予健脾合剂(]6ml/kg)灌胃,治疗周期均为14天。治疗周期结束后,每组随机抽取5只小鼠,随后通过16S rDNA高通量基因测序法分析治疗前后小鼠肠道菌群的变化。2.临床研究:本实验选取健康志愿者20例作为空白对照组(N),IBS-D脾虚证患者23例,其中西药组(WM)5例,中药组(CM)18例。N组未予特殊治疗;WM组予口服复合乳酸菌0.66gtid,CM组予以口服健脾合剂20ml tid,疗程均为2个月。分别记录N组及WM、CM组治疗前后的焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS);观察WM、CM组治疗前、用药每二周及治疗结束后的临床症状改变,予以中医症状量化分级评分;随后随机选取N组中5例健康者、WM及CM组中各5例患者治疗前后的粪便样本进行菌群检测,采用16S rDNA高通量基因测序法分析肠道微生态的变化。结果:1.实验研究:一般情况:造模后,IBS-D脾虚证小鼠体重明显降低(P<0.05)、Bristol评分明显升高(P<0.05),治疗后,健脾合剂组小鼠体重、进食量均增加(P<0.05),Bristol评分显著降低(P<0.05)。肠道菌群:本研究测序深度充分,样品均具有良好的丰富度与多样性。和空白组相比,IBS-D脾虚证小鼠粪便及结肠粘膜菌群的丰富度与多样性均降低(P<0.05);在门、纲、目、科、属、种六个分类水平上,造模前后小鼠的粪便及结肠粘膜菌群构成及构成比皆存在差异。健脾合剂干预后,IBS-D脾虚证小鼠肠道菌群的多样性提高(P<0.05),与空白组相比则无明显差异(P>0.05);在门、属水平上表现为有益菌丰度增加,有害菌丰度降低;且健脾合剂与复合乳酸菌干预后的小鼠肠道菌群多样性无明显差异(P>0.05)2.临床研究:临床疗效评定:CM-A的平均症状总积分为13±3.89,CM-B的平均症状总积分为3.4±2.87,健脾合剂干预后症状积分明显下降(P<0.05)。CM组中医症状疗效总有效率为73%,WM组为70%,两者差异不具有统计学意义(P>0.05)。从单项症状上看,CM组治疗后大便性状改变、腹痛、腹胀、倦怠乏力、神疲懒言、肠鸣矢气症状有明显改善(P<0.05);与WM组相比各单项中医症状均无明显差异(P>0.05)。CM组、WM组治疗前后患者的焦虑、抑郁指数均无明显变化(P>0.05)。肠道菌群:本研究测序深度充分,样品均具有良好的丰富度与多样性。结合Alpha多样性分析,健脾合剂干预后IBS-D脾虚证患者肠道菌群多样性有升高趋势,但差异不明显(P>0.05),且与复合乳酸菌干预后多样性无明显差异((P>0.05))。基于metastas分析,健脾合剂干预后 Granulicatella 丰度下调(P<0.05);CM-B 与 WM-B 相比,Bacteroides 丰度降低,Citrobacter丰度增高(P<0.05)。在门水平上,CM-B、WM-B的F/B均以升高为主;在属水平上,CM-A以Prevotella为主要优势菌,肠型多归于ET P,WM-A则以Bacteroides为主要优势菌,肠型多归于ETB;药物干预后,CM-B、WM-B均以Prevotella丰度降低,Bacteroides丰度增加为主,但其主要优势菌未变,肠型亦未表现出向其他肠型转变的趋势。结论:1.健脾合剂对IBS-D脾虚证患者有着较好的临床疗效,尤其对大便不成型、腹痛症状等主症有明显改善作用。2.健脾合剂可以提高IBS-D脾虚证肠道菌群多样性,并增加有益菌的丰度,降低有害菌的丰度,从而调节肠道微生态使之达到平衡。3.健脾合剂和复合乳酸菌对IBS-D脾虚证小鼠肠道菌群的干预作用基本一致,推测健脾合剂可能有益生元样作用。