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金荞麦(Fagopyrum Dibotrys)是我国民间的一种常用中草药,块根入药,性平、微凉、味苦、酸涩(彭勇,1996)。在我国古代就已经用于治疗多种疾病。金荞麦中含有大量的黄酮类化合物。本文主要研究了金荞麦根不同提取物的抗菌和免疫作用,并用血清药理学的方法探讨了金荞麦根含药血清的抗菌及免疫调节活性。试验分为以下五个部分:
Ⅰ、金荞麦根不同溶剂提取物的制备,采用索氏提取法,用水和不同浓度的乙醇对金荞麦根中的有效成分进行了提取,并以芦丁为标准品、硝酸铝—亚硝酸钠为显色剂,采用紫外分光光度法对金荞麦根各提取物中总黄酮类成分进行了含量测定,其中60%的乙醇根提取液中总黄酮的含量最高。
Ⅱ、为了筛选出具有较好抗菌活性的金荞麦根提取物,采用试管法测定了金荞麦根各提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌和鸡沙门氏菌的体外抑菌活性。结果显示金荞麦根各提取物对各受试菌的抑菌活性不同,其中60%的乙醇根提取液对各受试菌的抗菌活性最强。同时为了筛选出具有较好免疫调节活性的金荞麦根提取物,将各提取物按照不同的浓度加入到培养的鸡脾淋巴细胞中,培养48h后,用MTT法测定淋巴细胞增值的变化。结果表明,60%的乙醇根提取液免疫调节活性为最好。
Ⅲ、用筛选到的在体外具有较强抗菌活性及免疫调节活性的60%的乙醇根提取物制备含药血清。在本实验中,首先通过预实验确定最佳的含药血清制备方案,包括给药剂量、给药方案和采血时间点的确定。根据预试验结果,设立了四个实验组即三个剂量组(高40g生药/kg/d、中24g生药/kg/d、低剂量组6g生药/kg/d)和空白对照组(灌胃等体积的生理盐水),每天给药2次,连续给药14d,末次给药后40、80、120和180min分别翅下静脉采血,无菌分离血清,经56℃、30min灭活备用。此外我们还探讨了体外实验系统中的血清添加量问题。经研究发现,当血清添加量为2.5%时,金荞麦根含药血清具有极明显的促进脾淋巴细胞增值的作用(P<0.01)。然后,我们以2.5%的金荞麦根含药血清添加量,采用MTT法探讨了金荞麦根各含药血清对鸡脾淋巴细胞增值活性的影响,结果表明金荞麦根含药血清对鸡脾淋巴细胞的增值活性呈明显的时—效及量—效关系,其中以中剂量组120min时相含药血清对鸡脾淋巴细胞的增值活性为最高(P<0.05)。
Ⅳ、为了探讨含药血清对机体免疫调节活性的影响,用含药血清进行鸡脾淋巴细胞增值活性和鸡外周血T细胞分泌IL—2、IFN—γ活性免疫功能检测,40-180min时相的试验血清都能促进鸡脾淋巴细胞增值和鸡外周血T细胞分泌IL—2、IFN—γ的产生(P<0.01或P<0.05),其中2h时相的血清作用最强(P<0.01),在时效关系曲线上表现为峰值。结果表明,60%的金荞麦根乙醇提取物在灌胃40-180min时相的含药血清有免疫增强作用。
Ⅴ、运用血清药理学的方法测定了含药血清的抗菌活性。采用纸片扩散法测定了含药血清对各受试菌的体外抗菌活性,结果表明含药血清对各受试菌无体外抗菌活性。