胃液中色氨酸的高效液相色谱分析研究和表告依春的手性分离分析研究

来源 :中国科学院上海有机化学研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:austdqxy
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本论文分为两部分:   第一部分以高效液相色谱为主要手段研究了胃液中色氨酸的分析方法。   胃液中存在的荧光成分可能用于胃癌早期诊断。本文采用基于C18柱的高效液相色谱-紫外-荧光和离效液相色谱-紫外-质谱联用方法,证明胃癌患者胃液中的荧光物质主要为色氨酸。采用反相高效液相色谱-双波长紫外同时检测方法建立了胃液中色氨酸和利多卡因的定量分析方法,色谱柱为KromasilC18(150*4.6 mm)柱,流动相采用含1‰三氟乙酸的水-甲醇体系梯度淋洗。结果表明:色氨酸使用278 nm检测,浓度在0.50-200 mg/L范围内峰响应的线性关系缀好,利多卡因使用254 nm检测,浓度在20-5000mg/L范围内呈现很好的线性关系。色氨酸和利多卡因的检出限分别为0.15 mg/L和5.0 mg/L。高,中,低3个量的平均加样回收率分别在70.8%-110.4%(色氨酸)和87.1%-116。2%(利多卡因)。对38胃癌患者和48例非胃癌患者的胃液进行测试,用威氏符号秩次检验分析两组数据,显示两组胃液中色氨酸的含量存在显著性差异(P<0.05)。   采用基于强阳离子交换浸透限进色谱柱的高相液相.荧光检测方法建立了定量分析胃液中色氨酸含量的方法,色谱柱为SHISEIDO CAPCELL PAK MF SCXSGS0柱(150*4.6 mm),并在柱前串连两根SHISEIDO CAPCELL PAK MF Ph-1S-10桂(20 mm*4.0 mm)作预柱,流动相采用磷酸缓冲盐溶液-乙腈体系(磷酸缓冲盐溶液的pH值为3.5,浓度为90 mmol/L,乙腈与磷酸缓冲盐溶液的体积比为20/80);荧光检测的激发波长和发射波长分别为288 nm和330 nm。该方法对体液相容性好,单个样品的分析时间缩短至15 min以内;能检测0.20-100mg/L范围内胃液中色氨酸的浓度。色氨酸的检出限为0.05 mg/L,商,中,低3个量的平均加样回收率分别在80.0%-90.0%。对上述86例样品进行测试。比较高效液相色谱-荧光检测法与高效液相色谱-紫外检测法的分析结果,结果表明两种分析方法获得的测试结果没有差异。   为确认胃液中色氨酸的手性结构,采用CHIROBIOTIC R柱(250*4.6 mm,Advanced Separation Technology.Inc.)以50:50的甲醇-水作为流动相,建立了手性拆分DL-色氨酸的高效液相色谱-荧光检测方法,荧光检测的激发和发射波长分别为288 nm和330 nm,并在该条件下分析了从上文所述的86例胃液样品中挑选出的色氨酸含量不同的6例胃液样品,结果测试的胃液样品中色氨酸都为L型,未检出D型。   第二部分研究了高效液相色谱对DL-goitrin手性分离分析的方法。发现SHISEIDO CD-PH柱(250*4.6 mm)用己烷-乙醇(70:30,v/v)作流动相时和Daicel CHIRALPAK AD-RH柱(150*4.6 mm)用甲醇-水(30:70,v/v)作流动相时,能获得很好的分离效果。考察了用CD-PH分析桂分离DL-goitrin制备L-goitrin(告依春,goitrin)和D-goitrin(表告依春,epigoitrin)的条件以及用AD-RH分析柱制备D-goitrin和L-goitrin的位置异构体--(+)-vinyloxazolidine-2-thione和(-)-vinyloxazolidine-2-thione的方法。用高相液相色谱制备了上述四个光学纯的化含物并进行抗病毒实验测试。   首次建立了对goitrin和epigoitrin手性拆分和同时定量分析的高相液相色谱方法,使用Daicel Chiralpak AD-RH(150*4.6 mm)柱,流动相采用甲醇-水体系(30:70,v/v),紫外检测波长为244nm。方法在5.0-50 mg/L范围内线性关系好,检测限均为0.25 mg/L,加样回收率达到97.1%和97.5%。并用该方法分析了板蓝根颗粒冲剂提取液,板蓝根煎液,表告依春对照品,以及十字花科蔬菜(卷心菜,大白菜,萝卜和花菜)中goitrin和epigoitrin的含量。
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