硒是动物机体维持正常生理活动中的必需微量元素。Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)是一类重要的模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)。其中,TLR4信号通路是一条重要的炎症因子调控通路,参与多种疾病的发生与调控。目前对硒缺乏致鸡脾脏炎性损伤机制的研究较少,尤其是关于TLR如何参与硒缺乏雏鸡脾脏的炎性损伤机制尚不明确。因此,本试验从TLR及其信号传导的角度对硒缺乏雏鸡脾脏炎性损伤的机制进行了研究。首先,将200只1日龄健康肉鸡随机分为试验组和对照组。试验组鸡饲喂自配低硒饲料,对照组鸡饲喂全价配合饲料,分别于鸡15、25、35、45、55日龄时采取脾脏,应用组织病理学及超微病理学方法观察脾脏病理形态结构变化;实时荧光定量PCR方法检测脾脏8种ChTLRs(ChTLR1、ChTLR2、ChTLR3、ChTLR4、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15和ChTLR21)、My D88、TRIF、NF-κB及细胞因子(IL-6、TNF-α、IL-2和IFN-γ)mRNA表达变化;Western blot方法检测ChTLR4蛋白表达变化;主成分分析法分析8种ChTLRs与衔接蛋白My D88、TRIF之间的相关性。病理形态学结果显示,试验组雏鸡脾脏组织红髓和白髓分界不清,淋巴细胞数量减少,细胞核形状不规则,核内染色质分布不均,核膜破裂;线粒体肿胀,嵴紊乱、断裂;内质网肿胀。实时荧光定量PCR结果显示,在15、25、35、45、55日龄雏鸡脾脏中8种ChTLRs均有所表达,但表达量存在差异。与对照组相比,实验组雏鸡ChTLR1、ChTLR2、ChTLR3 mRNA的相对表达量先升高后降低,ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15 mRNA的相对表达量降低,ChTLR21 mRNA的相对表达量先降低后升高,而在15-45d,ChTLR4 mRNA的相对表达量及蛋白表达均高于对照组,且在15 d差异极显著(P<0.01)。试验组雏鸡TRIF mRNA的相对表达量在25-55 d高于对照组,NF-κB及IL-6 mRNA的相对表达量在15-45 d高于对照组。Western blot结果显示,在15-45 d ChTLR4蛋白表达量与对照组相比显著升高(P<0.01)。主成分分析结果显示ChTLR4和TRIF有很强的相关性。之后,又以鸡巨噬细胞HD11细胞为研究对象,将HD11细胞的ChTLR4基因沉默后,观察HD11细胞内ChTLR4及其通路分子mRNA表达情况。结果发现,ChTLR4 siRNA转染至HD11细胞后,细胞内ChTLR4、IL-6和NF-κB mRNA表达水平与试验组相比均显著下调(P<0.05)。TRIF siRNA转染至HD11细胞后,细胞内IL-6、TRIF和TNF-αmRNA表达水平与试验组相比均显著下调(P<0.05)。综上,ChTLR4在调节硒缺乏雏鸡脾脏炎性细胞因子表达过程中起着重要的作用,硒缺乏可通过ChTLR4/TRIF/NF-κB信号通路引起雏鸡脾脏炎性损伤。本研究从分子水平阐述了硒缺乏雏鸡脾脏免疫损伤发病机制,丰富了雏鸡硒缺乏免疫损伤的理论研究内容,为有效防治禽类代谢性疾病提供重要的科学依据。