狂犬病是一种致死性的人兽共患传染病，至今无有效的治疗方法，接种疫苗是控制狂犬病的最有效手段。灭活疫苗是目前用于人和家畜动物狂犬病预防最主要的疫苗制剂。细胞培养是灭活疫苗生产中最常用的病毒抗原制备技术，因此，病毒滴度检验是疫苗生产中重要的质量控制环节之一。在我国，兽用狂犬病灭活疫苗生产通常以细胞半数感染量（TCID50）作为病毒滴度检验方法。但是，该方法仅限于对活病毒进行检测，周期较长（至少两天），不利于疫苗生产效率的提高和疫苗半成品质量的控制。ELISA方法具有快速、准确、安全和操作简便的优点。双抗体夹心ELISA是目前用于抗原检测的主要形式，利用单克隆抗体可以有效提高检测的敏感性和特异性。本研究建立的狂犬病病毒双抗体夹心ELISA检测方法，利用的是针对狂犬病病毒核蛋白的单克隆抗体，并标记辣根过氧化物酶。标准品为BHK-21细胞培养的狂犬病病毒SRV9株。包被抗体为狂犬病免疫血清。本研究分为两部分：一、狂犬病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立通过Sepharose4B IgG亲和层析方法进行单克隆抗体的纯化，以郭春祥过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记；利用灭活的狂犬病病毒免疫小鼠，制备高免血清；通过BHK-21细胞进行狂犬病病毒SRV9株的培养和滴定，用于标准品的制备；通过矩阵法测定包被抗体和酶标抗体的工作浓度，建立以OD值为横轴，病毒滴度（TCID50/ml）为纵轴的标准曲线；对ELISA方法反应条件进行优化，确定最佳反应时间、敏感性、特异性、准确性和重复性。二、狂犬病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的应用利用建立的ELISA方法，对狂犬病灭活疫苗生产中的半成品进行检测，并与病毒灭活前的TCID50检测结果进行对比，评价本方法的准确性和应用效果。通过与成品疫苗免疫效力（NIH法）检验结果进行比较，确定本方法的可靠性。通过以上研究，建立了夹心ELISA检测方法。结果显示：本ELISA方法的检测灵敏度为1.0×106TCID950/ml～1.0×10TCID50/ml；对不同狂犬病病毒株均具有反应原性；与犬的常见病原（犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬腺病毒）无交叉反应；批内和批间重复检测OD值的最大变异系数分别为5.9%和11.7%；在应用于疫苗半成品检测时，本ELISA结果与病毒灭活前的TCID50结果完全一致，疫苗成品效力测定结果与ELISA检测结果亦相一致。以上结果表明，本研究建立了半定量检测狂犬病病毒量的双抗体夹心ELISA方法，具有良好的敏感性和特异性，检测结果与细胞半数感染量（TCID50）具有较高的一致性，且重复性较好；本研究建立的ELISA方法，能够对灭活疫苗生产中的半成品进行准确病毒定量，其检测结果与疫苗成品的免疫效力（NIH法）测定结果完全一致，表明该方法的使用有利于提高生产效率和质量控制水平。综上所述，本研究建立了一种应用性强，可靠性高，方便快速的狂犬病病毒半定量夹心ELISA检测方法，在疫苗生产中具有较好的应用价值。