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该实验旨在研究病毒性肝炎引起的肝硬化患者的外周血中PBMC对内毒素的反应,通过分离得到PBMC,用内毒素刺激,测定第3h和第6h的sCD14和TNF-α水平,同时检测mCD14的表达,研究其动态变化,以模拟机体CD14的变化过程.材料与方法:选择2001-2002年患有病毒性肝炎后肝硬化(符合2001年全国传染病及寄生虫学术会议修订的病毒性肝炎防治方案及诊断标准)的住院病人59例,其中男性43例,女性16例,伴有内毒素血症者29例,无内毒素血症者30例.健康对照组19例,男性11例,女性8例.所有病人及健康对照者均于抽血前禁食8-10小时,凌晨6 am抽取外周静脉血8-10ml,注入去内毒素试管中(去内毒素肝素抗凝),并取其上清液0.5ml于专用试管中,于4℃冰箱保存备用(测定内毒素含量).采用梯度离心法,用淋巴细胞分离液(d=1.077),分离得到PBMC.加入含10﹪FCS的PRMI 1640(2mmol/L谷氨酰胺,100IU/ml青霉素,100mg/ml链霉素),并记数细胞、检测细胞活力(应>95﹪);并将细胞配成浓度为2×10<6>/ml的细胞悬液备用.用内毒素刺激PBMC,其标准为每2×10<6>(细胞数)加入1ng的内毒素,然后置于培养箱中培养.培养条件:37℃,5﹪CO<,2>.于第3 h、6 h取上清液,于-70℃冰箱保存待测.mCD14的检测方法采用抗mCD14单克隆抗体(FITC标记)标记PBMC,用流式细胞仪记录阳性细胞百分率和平均荧光强度.采用ELISA方法检测上清液中的sCD14和TNF-α浓度.结论:肝硬化伴内毒素血症者的血浆sCD14水平明显高于无内毒素血症者和健康对照组,而后二者基本相似.Child-pugh C者的sCD14水平升高更明显.体外实验证明来自内毒素血症组的PBMCs对内毒素的刺激反应更敏感,释放的sCD14和TNF-α明显高于另外两组,提示这些细胞已处于预致敏状态.