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目的本研究通过RNA干扰技术,特异性沉默TGF-β1基因,验证复方麻杏石甘汤通过TGF-β/Smad信号通路调控,减轻放射性肺损伤的机制。方法1、清洁级SD大鼠18只,随机分为2组,中药组12只,正常对照组6只;中药组大鼠(根据成人剂量的15倍)给予中药灌胃,用于制备含药血清;正常对照组则予生理盐水灌胃,用于制备普通大鼠血清。每天给药两次,每次2ml,连续给药3d,末次给药后1h～2h采血。2、细胞培养,射线照射,频率为3.64Gy/min,总剂量为8Gy;3、RNA干扰特异性沉默TGF-β1基因;4、CCK-8法检测细胞活力;5、流式细胞仪检测细胞凋亡;6、PCR 检测 TGF-β1 mRNA 及 smad 蛋白 mRNA 水平;7、Western-blot检测smad蛋白水平。结果1、与空白对照、阴性对照组比较,干扰序列TGF-β1-1167、1367、1608组TGF-β1mRNA下降,差异有统计学意义(P<0.05),其中TGF-β1-1608基因沉默效率最高,用于后续实验。2、给药24、48、72小时后,与正常血清组比较,正常血清+siRNA组细胞活力均下降,差异有统计学意义(P<0.05);与正常血清+siRNA组比较,含药血清+siRNA组的细胞活力下降,差异有统计学意义(P<0.05)。3、与正常血清组比较,正常血清+siRNA组细胞凋亡率下降,差异无统计学意义(P>0.05);与正常血清+siRNA组比较,含药血清+siRNA组细胞凋亡率上升,差异有统计学意义(P<0.05)。4、与大鼠血清组比较,大鼠血清+siRNA组Smad2、Smad6mRNA下降,差异无统计学意义(P>0.05);Smad3、TGFβ1mRNA 下降,Smad7mRNA 上升,差异有统计学意义(P<0.05);与大鼠血清+siRNA组比较,10%含药血清+siRNA组Smad6mRNA上升、TGFβ1mRNA下降,差异均无统计学意义(P>0.05);Smad2、Smad3、Smad7mRNA上升,差异有统计学意义(P<0.05)。5、与大鼠血清组比较,大鼠血清+siRNA组P-Smad2、P-Smad3、Smad6、Smad7下降,差异有统计学意义(P<0.05);与大鼠血清+siRNA组比较,10%含药血清+siRNA组P-Smad2、P-Smad3下降,Smad6、Smad7上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1、针对TGF-β1基因特异性siRNA表达载体能够显著抑制靶基因的表达;2、沉默TGF-β1基因可抑制放疗后肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖,加入含药血清仍能抑制细胞增殖。这可能与转染不彻底,含药血清通过其他途径、靶点抑制增殖相关;3、沉默TGF-β1基因对放疗后肺泡Ⅱ型细胞凋亡无影响,加入含药血清能促进细胞凋亡。这可能与转染不彻底,含药血清通过其他途径、靶点促进凋亡相关;4、沉默TGF-β1基因可阻断放射性肺损伤TGF-β/smad信号通路,加入含药血清仍能传导该信号通路。这可能与转染不彻底,含药血清通过其他途径来传导信号相关。