人工膜上氨基酰类脂的仿生信号转导研究

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以生物体细胞G蛋白信号转导途径为模拟原型,利用化学生物学技术开展仿生信号转导研究,构建具有分子间通讯交流能力的人工细胞信号转导体系。以十六烷基胺和十六烷基溴为原料,经过取代、缩合等有机化学反应,最终合成了组建人工膜的阳离子型肽脂质:溴化N,N-二-十六烷基-Nα-6-三甲胺基己酰-L-丙氨酰胺(N+C5Ala2C16)。利用双十六烷基胺和Boc保护氨基酸为原料,合成了三种氨基酰类脂用作人工受体:N,N-二-十六烷基-甘氨酰胺(Gly2C16)、N,N-二-十六烷基-丙氨酰胺(Ala2C16)、N,N-二-十六烷基-色氨酰胺(Trp2C16)。在pH7.00、40℃条件下,以吡哆醛磷酸(PLP)为信号分子、乳酸脱氢酶(LDH)为效应器分别测定甘氨酰类脂、丙氨酰类脂和色氨酰类脂三种氨基酰类脂与PLP的结合能力、检测三种氨基酰类脂-PLP复合物与Cu2+的结合情况、研究三种氨基酰类脂启动被Cu2+抑制的LDH报告系统的特点,考察三种氨基酰类脂作为仿生信号转导体系受体的可行性。研究结果表明,在终浓度为1.5mmol/l肽脂质(N+C5Ala2C16)(肽脂质与氨基酰类脂摩尔比为37.5∶1)的囊泡体系中,三种氨基酰类脂都能与终浓度为20μmol/l的PLP形成希夫碱(其中以甘氨酰类脂的结合能力最强,色氨酰类脂的结合能力最弱),并进而结合Cu2+,启动效应器乳酸脱氢酶LDH(酶活性受Cu2+抑制)利用NADH将底物丙酮酸钠还原成乳酸钠。实验结果表明,三种氨基酰类脂均可用作仿生信号转导体系的膜表面受体,进行基于人工膜的细胞信号转导仿生研究。研究结果表明,氨基酰类脂中氨基酸侧链基团对受体与信号分子的识别结合有影响。
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